告別背景高，ELISA實驗之洗滌小技巧！

  ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)的一個顯著優(yōu)勢在于它能夠通過反復洗滌有效去除未結合的分子，從而實現(xiàn)高特異性檢測。這一特性使得ELISA能夠從復雜樣品中特異性地捕獲目標抗原或抗體，并進行定量分析。憑借其多功能性和靈活性，ELISA已被廣泛應用于檢測各種生物分子，包括蛋白質、激素、細胞因子等等。作為ELISA實驗的一部分，了解洗滌步驟的參數(shù)對于從ELISA檢測中獲得最佳結果至關重要。

  ELISA洗滌方法

  ELISA洗滌方法分為手工洗板和洗滌劑洗板2種，下面詳細為您介紹：

自動洗滌

  目前的洗板機一般使用兩種類型的洗板器：固定和浮動。浮動式中的吸頭可以在洗滌過程中自由上下移動，確保每個孔都能被清洗干凈，尤其適用于底部形狀不規(guī)則的孔板，例如U型底或V型底；而固定這種類型洗頭的吸液針位置固定，通常用于清洗平底孔板。

  使用洗板機清洗提供更一致和標準化的洗滌，減少人為誤差。設置合適的洗滌量，確保每個孔都能充分洗滌，在進行ELISA等實驗時，應參考試劑盒說明書或相關文獻，優(yōu)化洗板機的參數(shù)，以獲得最佳的實驗結果。

  手工洗滌

  采用手工洗板，有幾點需要注意。使用8道或12道微量移液器，采用后向抽吸法洗滌；不同廠家的洗液不要互相混合。洗板時保證微孔板平放，洗液注滿孔內，但盡量避免漏液和溢出，最好是每孔300μl；洗板次數(shù)一般為3次，要保證板的浸泡時間。次浸泡時間一般為30-60秒；盡量減少洗液殘留量。建議每次洗完后拍打板子并及時更換吸水紙，避免吸水紙碎片粘附在反應孔上。

  洗滌參數(shù)的優(yōu)化

  洗滌量

  需要優(yōu)化的最重要的參數(shù)之一是清洗量。用于清洗ELISA孔的清洗液量會影響清洗的嚴格性：清洗液量太少，可能殘留未結合的分子，從而大大增加背景信號；清洗液量太多，可能會剝離特定結合的分子。

  根據(jù)經驗，清洗量至少應與涂層量一樣高；廠家會在數(shù)據(jù)表上列出涂層量，為您的優(yōu)化提供起點。常用的行業(yè)標準是200μl，廠家通常會建議300μl的清洗量。

  實驗初期，大家可以參考試劑盒說明書或相關文獻中推薦的洗滌量作為起始值。

  洗滌次數(shù)

  洗滌次數(shù)與清洗量一樣，洗滌次數(shù)太少會導致背景高，而清洗次數(shù)太多會降低信號強度。洗滌次數(shù)通常為三次。實驗初期，大家可以參考試劑盒說明書或相關文獻中推薦的洗滌次數(shù) 作為起始值。

  抽吸參數(shù)

  優(yōu)化洗滌緩沖液的抽吸非常重要。需要考慮幾個變量，包括抽吸高度、抽吸方法和孔形狀。

  抽吸高度，即孔底到抽吸頭的距離，對孔的殘留量有重大影響。洗滌緩沖液的殘留量包括未結合的分子，體積越大，背景就越高。剛性抽吸頭的最佳高度范圍僅為0.1毫米；即使稍微過高或過低，殘留量也會大幅增加。精確校準洗滌步驟對于剛性抽吸頭至關重要。浮動頭可以根據(jù)體積在孔中上下移動，因此調整高度就不那么重要了。

  孔本身的形狀也會影響殘留量。具有尖角的孔往往保留最多的殘留量，而V形孔保留的殘留量最少。如果您遇到難以排除的高背景，請排查此參數(shù)。

  鑒于清洗步驟的重要性，您在進行敏感實驗之前進行測試來校準清洗。

  上述是ELISA實驗洗滌較為關鍵的幾個要點，掌握這些洗滌要點，可以有效降低背景信號，提高實驗的信噪比，從而獲得更可靠和一致的ELISA實驗結果。