產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增野牛奧斯特線蟲,與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,但只能用于科研。
規(guī)格及成分:
編號 |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL(紅蓋) |
試劑二 |
超純水 |
1 mL(亮黃色) |
試劑三 |
野牛奧斯特線蟲PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑四 |
野牛奧斯特線蟲PCR 陽性對照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:
樣品 RNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容??梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品,則需要做N+2個提取,包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 野牛奧斯特線蟲 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系):
3. 對N+2個樣品,在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照,故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分:
成份 |
N+2 個樣品管 |
PCR 陰性對照 |
PCR陽性對照 |
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
野牛奧斯特線蟲PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
N+2個樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
PCR 陰性對照(水) |
-- |
18μL |
-- |
PCR 陽性對照(野牛奧斯特線蟲PCR陽性對照1000倍稀釋液) |
-- |
-- |
18μL |
過程 |
溫度 |
時間 |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反應(yīng)35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
|
72℃ |
40 sec |
|
延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),陰性對照必須無任何擴增,否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示:
本公司的所有產(chǎn)品,僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!