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品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

        

      

    

    

      
    

  

    

	


	

		
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試劑盒實(shí)驗(yàn)操作視頻

				

					
試劑盒實(shí)驗(yàn)視頻操作

					

						
						 

	





	  實(shí)驗(yàn)步驟： 




  1. 樣品準(zhǔn)備



  裂解液（RIPA）準(zhǔn)備-----每100 ul RIPA加入1 ul PMSF和1 ul的原釩酸鈉溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。加入PMSF，加入原釩酸鈉溶液。



  組織樣本-----黃豆大小組織剪碎，加入200-300 ul配備好的裂解液，冰上研磨，12000轉(zhuǎn)離心5 min，取上清。



  貼壁細(xì)胞-----6孔板一個(gè)孔長(zhǎng)滿，加150 ul配備好的裂解液，冰上裂解5-10 min，槍頭吹打，吸取裂解好的樣本，轉(zhuǎn)入EP管，12000轉(zhuǎn)離心5 min，取上清。



  懸浮細(xì)胞-----細(xì)胞轉(zhuǎn)入離心管，2000轉(zhuǎn)離心5 min，棄上清，加入PBS清洗，2000轉(zhuǎn)離心5 min，棄上清，每20 ul體系細(xì)胞加入150 ul裂解液，冰上裂解5-10 min，槍頭吹打充分裂解，12000轉(zhuǎn)離心5 min，取上清。



  2. 蛋白濃度測(cè)定



  標(biāo)準(zhǔn)曲線制備



  待檢樣本上樣



  加入顯色劑，室溫避光20-30 min



  酶標(biāo)儀測(cè)定OD值



  計(jì)算蛋白上樣量（建議每樣本上樣總蛋白含量為50 μg）



  3. 樣本變性



  每40 μL蛋白，加10 ul的5XSDS 上樣緩沖液



  沸水浴10 min



  -20℃保存



  4. SDS-PAGE膠制備



  灌入分離膠



  無水乙醇?jí)浩?br />


  分離膠完全聚合后，倒出無水乙醇



  雙蒸水沖洗



  濾紙吸干



  加入濃縮膠



  插上梳齒



  濃縮膠完全聚合后取出梳齒



  5. 電泳



  膠固定到電泳槽



  倒入電泳液



  加樣，加marker,



  電泳----80 V恒壓至溴酚藍(lán)到濃縮膠與分離膠交界處，改110 V恒壓至溴酚藍(lán)到凝膠底部