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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
羊傳染性胸膜肺炎又稱羊支原體性肺炎，是由支原體所引起的一種高度接觸性傳染病，其臨床特征為高熱，咳嗽，胸和胸膜發(fā)生漿液性和纖維素性炎癥，取急性和慢性經(jīng)過，病死率很高。引起山羊傳染性胸膜肺炎的病原體為絲狀支原體山羊亞種，為細(xì)小、多變性的微生物，革蘭氏染色陰性。在自然條件下，絲狀支原體山羊亞種只感染山羊，3 歲以下的山羊最易感染，而綿羊肺炎支原體則可感染山羊和綿羊。本病常呈地方流行性，接觸傳染性很強(qiáng)，主要通過空氣-飛沫經(jīng)呼吸道傳染。陰雨連綿，寒冷潮濕，羊群密集、擁擠等因素，有利于空氣-飛沫傳染的發(fā)生；多發(fā)生在山區(qū)和草原，主要見于冬季和早春枯草季節(jié)，羊只營養(yǎng)缺乏，容易受寒感冒，因而機(jī)體抵抗力降低，較易發(fā)病，發(fā)病后病死率也較高。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)檢測絲狀支原體山羊亞種的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增絲狀支原體山羊亞種，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：
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編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL（紅蓋） |
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試劑二 |
超純水 |
1 mL（亮黃色） |
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試劑三 |
絲狀支原體山羊亞種 PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑四 |
絲狀支原體山羊亞種 PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容?？梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對照和一個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 絲狀支原體山羊亞種 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：
3. 對N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對照和一個(gè)PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：
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成份 |
N+2 個(gè)樣品管 |
PCR 陰性對照 |
PCR陽性對照 |
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PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
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絲狀支原體山羊亞種PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2個(gè)樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
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PCR 陰性對照（水） |
-- |
18μL |
-- |
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PCR 陽性對照（絲狀支原體山羊亞種PCR陽性對照1000倍稀釋液） |
-- |
-- |
18μL |
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過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
|
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示：
本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
