人源心肌細胞(IPSC誘導(dǎo)心肌細胞)

細胞名稱

人源心肌細胞（IPSC誘導(dǎo)心肌細胞）

細胞品牌

通蔚生物

細胞簡介

人源心肌細胞（正常型）是一種即用型的高純度心肌細胞產(chǎn)品。將誘導(dǎo)多能干細胞高效分化、純化而成。心肌細胞主要由具備自主電生理活動的心室肌樣細胞組成，同時也包含少量心房肌和竇房結(jié)樣細胞。這些細胞表達常規(guī)的心肌特異性基因，包括多種收縮蛋白和離子通道。同時，心肌細胞具備經(jīng)典的心肌細胞電生理活性，能夠?qū)﹄妼W(xué)、生物化學(xué)和機械刺激做出心肌細胞的常規(guī)反應(yīng)。以電生理和鈣轉(zhuǎn)導(dǎo)信號記錄為例，這些細胞可以作為新藥篩選，毒理學(xué)測定和其他生理學(xué)研究的理想工具。

產(chǎn)品優(yōu)勢

高純度人源細胞：與傳統(tǒng)鼠源心肌細胞不同，心肌細胞是一種高純度的體外人源細胞。嚴格的質(zhì)檢把控，確保心肌細胞純度達95%以上。特有人類心肌細胞屬性。

動作電位：具備正常人類心臟的標準電生理學(xué)特征，受到電刺激后產(chǎn)生搏動。  

收縮功能：具備正常人類心臟的電收縮偶聯(lián)，具備心臟特有的收縮功能，自主搏動節(jié)律接近成人竇性心律。

離子通道：具備正常人類心肌細胞的絕大部分離子通道，為科學(xué)研究提供更準確的模型疾病特異型細胞通過重編程疾病特異型體細胞，例如表皮成纖維細胞及CD34+血細胞。

細胞規(guī)格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基

人源心肌細胞專用培養(yǎng)基

傳代特征

心肌IPSC誘導(dǎo)心肌細胞是終末分化的功能細胞，與人體內(nèi)的心肌細胞性質(zhì)相同，不能增殖擴增

凍存細胞

凍存細胞存于-80℃冰箱，2周有效期；長期需液氮儲存

消化液

/

細胞貨期

7-8周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨（免運輸費用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用）

供應(yīng)范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

需要材料

1.DPBS, No Calcium, No Magnesium  2.RPMI1640 3.FBS

心肌細胞進行再接種

a.如果需要將心肌細胞按合適密度接種到新的培養(yǎng)皿/瓶中，可對心肌細胞進行再接種，再接種操作會導(dǎo)致20%左右的細胞死亡，即損失20%的細胞。

b.室溫平衡心肌細胞復(fù)蘇液、DPBS溶液，37℃預(yù)熱心肌細胞消化液。

c.取出心肌細胞鋪板液包被過的培養(yǎng)皿/瓶，吸去心肌細胞鋪板液并加入適量心肌細胞復(fù)蘇液，置于5%CO 2 的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中。

d.吸除心肌細胞培養(yǎng)基，加入DPBS溶液清洗一次。

e.移除DPBS，加入預(yù)熱的心肌細胞消化液使之完全覆蓋皿/瓶底。

f.37℃孵育3-5分鐘，顯微鏡下觀察到大部分細胞相互分離，表明達到理想的消化時間。

g.向皿/瓶中加入消化液3-5倍體積的RPMI1640+10%FBS終止消化，用槍扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的心肌細胞脫落，將細胞轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，再加入適量中和液沖洗皿/瓶底，收集剩余細胞加入15ml離心管中，300g離心5分鐘。

I .小心移除上清，用心肌細胞復(fù)蘇液重懸細胞，輕柔吹打混勻，并接種到包被過的培養(yǎng)皿/瓶中，十字晃動使細胞均勻分布。

II.5%CO 2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時后，更換為心肌細胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

III.心肌細胞需要在二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2-8天恢復(fù)搏動；此期間心肌細胞需要每隔48h換一次心肌細胞培養(yǎng)基。

重要提醒：吹打力度要輕柔，避免損傷細胞。亦可用心肌細胞培養(yǎng)基+10%FBS終止消化。

培養(yǎng)材料準備

心肌細胞鋪板液包被培養(yǎng)皿/瓶：在4℃冰面上，往培養(yǎng)皿/瓶中添加心肌細胞鋪板液至完全覆蓋皿/瓶底(建議1ml/六孔板單孔)，37℃包被1小時。如果暫時不用，可用塑封膜封口后2-8℃儲存，并于1周內(nèi)使用，保存期間心肌細胞鋪板液需始終保持完全覆蓋皿底。

重要提醒：操作時需要將鋪板液始終置于冰上；正確操作下鋪板液應(yīng)呈清亮，若操作時間過長或溫度過高，鋪板液會變得粘稠甚至呈膠狀，不宜使用。

心肌細胞復(fù)蘇(適用于凍存的細胞）

a.將心肌細胞復(fù)蘇液從4°C冰箱中取出，室溫平衡30分鐘。

b.打開水浴鍋，設(shè)定溫度為37°C。

c.開啟生物安全柜進行紫外滅菌30分種。

d.在冰上將1ml心肌細胞鋪板液加入6孔板的一個孔中(0.1ml/cm 2 )，隨即前后左右晃動6孔板，使鋪板液均勻覆蓋孔的表面。

e.將剩余鋪板液迅速放回冰箱，將6孔板放入細胞培養(yǎng)箱中孵育1小時。

f.取出孵育好的6孔板，放于生物安全柜中，吸除心肌細胞鋪板液后，立刻在孔內(nèi)加入1ml 心肌細胞復(fù)蘇液。

g.從高效液氮儲存罐中取出需要復(fù)蘇的細胞，將其放于干冰中暫存。

h.從干冰中取出細胞，迅速將凍存管的下1/2沒入水浴鍋中，輕柔晃動1-2分鐘至管中僅剩一小塊冰時，將其取出。

i.75%酒精擦拭凍存管表面后，將其放入生物安全柜中，擰開管蓋，用1ml槍尖輕柔的將管中液體盡可能多的轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，用1ml心肌細胞復(fù)蘇液輕柔沖洗凍存管，以5秒鐘一滴的速度將沖洗液緩慢滴加入15ml離心管，邊滴加邊輕柔晃動離心管。

j.再用槍尖以同樣速度，滴加1ml心肌細胞復(fù)蘇液至15ml離心管，邊滴加邊輕柔晃動離心管。

k.用移液管由慢（2秒鐘一滴）到快的滴加9ml心肌細胞復(fù)蘇液，同時輕柔晃動離心管。300g離心5分鐘。

l.在生物安全柜內(nèi)吸除上清，用2ml移液管取1ml心肌細胞復(fù)蘇液輕柔吹打細胞沉淀3-5次后，將其加入6孔板中，前后左右十字晃動混勻（可按比例稀釋計數(shù)）。

m.顯微鏡下觀察，細胞均勻分布。

n.在6孔板上標記好細胞名稱、日期以及操作人員后，將其放入細胞培養(yǎng)箱，再次前后左右晃動混勻，放入細胞培養(yǎng)箱種培養(yǎng)24-48小時至絕大多數(shù)細胞貼壁后即可換液為心肌細胞培養(yǎng)基。

重要提醒：心肌細胞復(fù)蘇計數(shù)后，可按需求接種至需要的培養(yǎng)容器；

心肌細胞培養(yǎng)時，按照推薦的密度接種，能夠抑制成纖維細胞生長速度；

重要提醒：心肌細胞復(fù)跳后，建議繼續(xù)培養(yǎng)1-2天穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

心肌細胞維持

a.將心肌細胞培養(yǎng)基室溫平衡30分鐘。

b.將心肌細胞用心肌細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，每48小時換液一次。更換時，貼壁加入培養(yǎng)基避免刮碰細胞；亦可加入標準量150%的心肌細胞培養(yǎng)基，每72小時換液一次。

重要提醒：細胞在6-8周內(nèi)性狀穩(wěn)定。如果需要長期培養(yǎng)，為了維持細胞穩(wěn)定性和純度，需要定 期采用心肌細胞純化液進行處理,一般每6周處理一次

重要提醒

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

到貨須知

1. 收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

3. 由于運輸?shù)脑?，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

細胞予重發(fā)

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。

6. 細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

特別說明

上海通蔚生物客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務(wù)電話021-54845833或15800441009，我們隨時給予實驗中的免費解答。