細(xì)胞信息
細(xì)胞名稱 |
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細(xì)胞品牌 |
通蔚生物 |
種屬來源 |
駱駝 |
組織來源 |
駱駝脾臟 |
生長(zhǎng)特性 |
半懸浮生長(zhǎng) |
分離方法 |
通過密度梯度離心獲得 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
單核細(xì)胞是血液中最大的血細(xì)胞,是機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分。與其他血細(xì)胞比較,單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶,并且具有更強(qiáng)的吞噬作用。它通過吞噬和產(chǎn)生抗體等方式來抵御和消滅入侵的病原微生物。單核細(xì)胞能吞噬異物產(chǎn)生抗體,在機(jī)體損傷治愈、抗御病原的入侵和對(duì)疾病的免疫方面起著重要的作用。機(jī)體發(fā)生炎癥或其他疾病都可引起單核細(xì)胞總數(shù)百分比發(fā)生變化,因此檢查單核細(xì)胞計(jì)數(shù)成為輔助診斷的一種重要方法。在機(jī)體的防護(hù)、免疫和創(chuàng)傷愈治過程中起協(xié)同作用。盡管它們是血液中的一類細(xì)胞成分,但它們功能的發(fā)揮,更多地體現(xiàn)在循環(huán)管道外的器官組織中。在功能方面它們與這些器官組織中的許多細(xì)胞成分如巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等密切相關(guān)。 |
細(xì)胞鑒定 |
MO-1或MO-2免疫熒光染色為陽(yáng)性,細(xì)胞純度高于90% |
支原體檢測(cè) |
駱駝脾臟單核細(xì)胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌 |
細(xì)胞規(guī)格 |
5x10?cells/T25或1mL凍存管 |
培養(yǎng)基 |
駱駝脾臟單核細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
培養(yǎng)條件 |
氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ |
凍存條件 |
無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存 |
細(xì)胞代數(shù) |
第1代 |
細(xì)胞貨期 |
現(xiàn)貨 ,1周左右 |
發(fā)貨方式 |
復(fù)蘇發(fā)貨(免運(yùn)輸費(fèi)用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用) |
供應(yīng)范圍 |
僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用,絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 |
特別說明 |
具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作
收貨處理 |
取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) |
細(xì)胞復(fù)蘇 |
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
傳代密度 |
細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) |
傳代比例 |
首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 |
傳代方法
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a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細(xì)胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
細(xì)胞凍存 |
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
注意事項(xiàng)
重要提醒 |
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。 2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。 3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。 4. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 |
到貨須知 |
1. 收到細(xì)胞后,首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否完全揮發(fā),細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2. 靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照),記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 3. 由于運(yùn)輸?shù)脑?,部分?xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 |
售后服務(wù)
細(xì)胞予重發(fā) |
1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)。 |
2. 收到細(xì)胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。 |
3. 收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
細(xì)胞不予重發(fā) |
1. 客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā)。 |
2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 |
3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 |
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā)。 |
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)。 |
6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,不重發(fā)。 |
特別說明 |
上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以撥打免費(fèi)服務(wù)電話021-54845833或15800441009,我們隨時(shí)給予實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。 |