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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 人肺癌成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 肺癌組織
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
人肺癌成纖維細(xì)胞分離自肺癌組織；肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮，故亦稱支氣管肺癌。肺癌可向四周乃至全身擴(kuò)散。肺癌發(fā)病率和死亡率增長最快，對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來許多國家都報(bào)道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明確，大量資料表明，長期大量吸煙與肺癌的發(fā)生有非常密切的關(guān)系。肺癌，其實(shí)不是一種病，而是幾十種病的組合，有多種亞型，多種特性；根據(jù)肺癌細(xì)胞在顯微鏡下的形態(tài)特點(diǎn)，可以初步分為兩種類型：小細(xì)胞肺癌(SC LC )15% 和非小細(xì)胞肺癌(N SC LC )85% 。
這兩種類型肺癌的生長特點(diǎn)、擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)和治療方案均不相同。絕大多數(shù)肺癌是非小細(xì)胞肺癌，約占85% 。它又能進(jìn)一步被分為三類，分別是：腺癌，鱗癌和大細(xì)胞癌。其中腺癌是最主要的類型，約占非小細(xì)胞肺癌中的50% 。如果是不吸煙的女性患者，幾乎全部都是腺癌。人肺癌成纖維細(xì)胞是肺癌組織中的癌相關(guān)成纖維細(xì)胞，癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer associated fibroblast，C A F)在腫瘤微環(huán)境中的重要作用已受到廣泛的重視。
該細(xì)胞通過與癌細(xì)胞的直接接觸、分泌多種因子以及對(duì)腫瘤基質(zhì)的改造，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移甚至耐藥性的發(fā)生。隨著研究的深入，有人提出C A F可能成為抗腫瘤治療的新靶點(diǎn)。然而C A F的分化來源多樣，相應(yīng)的形態(tài)和功能各異，因此深入了解C A F的分化來源有利于更全面地認(rèn)識(shí)腫瘤發(fā)展的機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)，體外培養(yǎng)肺癌成纖維細(xì)胞對(duì)肺癌研究有重要意義。
方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人肺癌成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人肺癌成纖維細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： 貼壁不包被
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 ： 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人肺癌成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人肺癌成纖維細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
