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人滑膜成纖維細(xì)胞（骨性關(guān)節(jié)炎）
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 人滑膜成纖維細(xì)胞（骨性關(guān)節(jié)炎）
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 滑膜組織
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
人滑膜成纖維細(xì)胞（骨性關(guān)節(jié)炎）分離自滑膜組織；滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu)，各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，同時在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎（O A ）以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣?，其病理改變累及關(guān)節(jié)的各個組成部分，但絕不僅局限于軟骨，還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響，相互作用，共同加速關(guān)節(jié)的退變。
滑膜細(xì)胞是構(gòu)成滑膜層的最大細(xì)胞群體，是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中，基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布。滑膜由A型（巨噬樣滑膜細(xì)胞）、B型（成纖維樣滑膜細(xì)胞）以及C 型（樹突細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞）細(xì)胞組成。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（R A ）是一種病因未明的慢性、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病。其特征是手、足小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié)、對稱性、侵襲性關(guān)節(jié)炎癥，經(jīng)常伴有關(guān)節(jié)外器官受累及血清類風(fēng)濕因子陽性，可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形及功能喪失。R A 的發(fā)病可能與遺傳、感染、性激素等有關(guān)。R A 關(guān)節(jié)炎的病理主要有滑膜襯里細(xì)胞增生、間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤，以及微血管的新生、血管翳的形成及軟骨和骨組織的破壞等。
體外培養(yǎng)人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞對于研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病的發(fā)生機(jī)理、治療具有重要意義。退行性骨關(guān)節(jié)病又稱骨關(guān)節(jié)炎（O A ）、退行性關(guān)節(jié)炎、老年性關(guān)節(jié)炎、肥大性關(guān)節(jié)炎，是一種退行性病變，系由于增齡、肥胖、勞損、創(chuàng)傷、關(guān)節(jié)先天性異常、關(guān)節(jié)畸形等諸多因素引起的關(guān)節(jié)軟骨退化損傷、關(guān)節(jié)邊緣和軟骨下骨反應(yīng)性增生。本病多見于中老年人群，好發(fā)于負(fù)重關(guān)節(jié)及活動量較多的關(guān)節(jié)（如，頸椎 、腰椎、膝關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)等）。過度負(fù)重或使用這些關(guān)節(jié)，均可促進(jìn)退行性變化的發(fā)生。臨床表現(xiàn)為緩慢發(fā)展的關(guān)節(jié)疼痛、壓痛、僵硬、關(guān)節(jié)腫脹、活動受限和關(guān)節(jié)畸形等。
方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人滑膜成纖維細(xì)胞（骨性關(guān)節(jié)炎）采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人滑膜成纖維細(xì)胞（骨性關(guān)節(jié)炎）經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、bFG F、Insulin、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 ： 可傳3-5代左右
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人滑膜成纖維細(xì)胞（骨性關(guān)節(jié)炎）體外培養(yǎng)周期有限；建議使用普諾賽配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人滑膜成纖維細(xì)胞（骨性關(guān)節(jié)炎）是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳3-5代左右；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.貼壁細(xì)胞消化
1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2）添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入3-5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3）用吸管輕輕吹打混勻，調(diào)整合適密度按實(shí)驗(yàn)需求接種對應(yīng)實(shí)驗(yàn)器皿，然后按器皿大小
補(bǔ)充適當(dāng)新鮮的完全培養(yǎng)基，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 復(fù)蘇操作說明
1. 準(zhǔn)備好37度水浴鍋，預(yù)熱至37度。
2. 準(zhǔn)備好T25培養(yǎng)瓶，加入10ml完全培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內(nèi)凍存細(xì)胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內(nèi)進(jìn)水導(dǎo)致污染），迅速放于水浴鍋內(nèi)，于1min內(nèi)融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺內(nèi)。
5. 吸取凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液，加入步驟2中準(zhǔn)備好的T25培養(yǎng)瓶內(nèi)，8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，靜置培養(yǎng)24h，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞不同換液操作方法）。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
