發(fā)布時(shí)間:2022-01-15 發(fā)布作者:上海通蔚生物
夾心法
夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原,一般之操作步驟為:
將具有專一性之抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
加入待測(cè)檢體,檢體中若含有待測(cè)之抗原,則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
洗去多余待測(cè)檢體,加入另一種對(duì)抗原專一之一次抗體,與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)
洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,加入帶有酵素之二次抗體,與一次抗體鍵結(jié)
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果
間接法
間接法常用于檢測(cè)抗體,一般之操作步驟為:
將已知之抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余之抗原。
加入待測(cè)檢體,檢體中若含有待測(cè)之一次抗體,則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
洗去多余待測(cè)檢體,加入帶有酵素之二次抗體,與待測(cè)之一次抗體鍵結(jié)。
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,藉儀器(ELISA reader)測(cè)定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。
競(jìng)爭(zhēng)法
競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,一般用于檢測(cè)小分子抗原,其操作步驟為:
將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
加入待測(cè)檢體,使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
加入帶有酵素之抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來。
洗去檢體與帶有酵素之抗原,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少,顯色也就越淺。
當(dāng)需要偵測(cè)無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí),一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。