原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些步驟？一文盤點(diǎn)原代細(xì)胞培養(yǎng)4大步驟

  原代細(xì)胞是從組織機(jī)體中分離后并且在體外首次培養(yǎng)的細(xì)胞，在體外特定的培養(yǎng)條件下進(jìn)行生長(zhǎng)和繁殖，當(dāng)細(xì)胞增值到一定密度（通常在70-90%匯合度）。為了維持細(xì)胞生長(zhǎng)和狀態(tài)活力，需要將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮生長(zhǎng)的培養(yǎng)基新容器中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，也稱作繼代培養(yǎng)。相關(guān)閱讀：《什么是原代細(xì)胞》

  原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟

  1、組織收集和處理

  在無菌條件下，從動(dòng)物或人體組織分離樣本。在收集和處理樣本可以采用消化酶、機(jī)械切割或抗體磁珠等方法，將組織分成單個(gè)細(xì)胞。組織分散成單個(gè)細(xì)胞后，需要進(jìn)行洗滌、過濾（例如使用細(xì)胞篩）等步驟去除組織碎片和酶。

  2、細(xì)胞分離

  根據(jù)目標(biāo)細(xì)胞的特性，選擇合適的細(xì)胞分離方法。常用的方法包括密度梯度離心、熒光激活細(xì)胞分選(FACS)、磁性激活細(xì)胞分選(MACS)等。例如，可以使用密度梯度離心法根據(jù)細(xì)胞密度的差異分離不同類型的細(xì)胞。篩選、沉淀和離心等步驟通常作為這些方法的輔助步驟，用于去除雜質(zhì)、收集細(xì)胞或更換緩沖液等。

  3、培養(yǎng)基的選擇和準(zhǔn)備

  根據(jù)分離出的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康模x擇合適的培養(yǎng)基。不同的細(xì)胞類型對(duì)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分、生長(zhǎng)因子和其他添加劑的需求不同。查閱文獻(xiàn)或參考ATCC等細(xì)胞庫的建議，選擇適合目標(biāo)細(xì)胞的培養(yǎng)基配方。常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括DMEM、RPMI-1640、Ham'sF-12等，但通常需要根據(jù)具體細(xì)胞類型進(jìn)行調(diào)整。

  4、細(xì)胞培養(yǎng)和傳代

  接下來對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和傳代。將分離純化后的細(xì)胞重懸于到合適的培養(yǎng)基中，然后接種到預(yù)先用細(xì)胞外基質(zhì)（例如膠原蛋白、纖連蛋白、明膠等）包被的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，提供適當(dāng)?shù)臏囟?、濕度?/span>CO2濃度等條件。原代細(xì)胞通常生長(zhǎng)較慢且有限，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定匯合度（通常為70-90%）時(shí)，需要進(jìn)行傳代。

  原代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

  1、保持無菌條件

  細(xì)胞培養(yǎng)需要在無菌環(huán)境下進(jìn)行，以防止細(xì)胞被細(xì)菌和真菌污染。在進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)之前，必須確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境和所操作工具、培養(yǎng)皿都處于嚴(yán)格的無菌狀態(tài)。使用消毒劑清潔操作區(qū)域，并穿戴合適個(gè)人防護(hù)設(shè)備，如穿戴無菌手套等。

  2、選擇合適的培養(yǎng)基

  根據(jù)細(xì)胞類型不同選擇合適的培養(yǎng)基，查閱文獻(xiàn)或參考ATCC等細(xì)胞庫的建議，選擇適合目標(biāo)細(xì)胞的培養(yǎng)基配方。同時(shí)也要確保培養(yǎng)基和補(bǔ)充物質(zhì)配方適合目標(biāo)細(xì)胞類型，并檢查過期日期和存儲(chǔ)條件。

  3、細(xì)胞密度控制

  細(xì)胞密度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和功能有重要影響。細(xì)胞密度過高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞過度接觸和競(jìng)爭(zhēng)，影響細(xì)胞生長(zhǎng)；細(xì)胞密度過低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。因此，根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)要求控制細(xì)胞密度，通常通過細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

  4、注意細(xì)菌污染

  在細(xì)胞培養(yǎng)過程，需要定期檢查細(xì)胞是否受到細(xì)菌、真菌和病毒等污染。可以通過細(xì)菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)和PCR等方法進(jìn)行檢測(cè)。如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌和真菌污染，需立即采取措施，例如更換培養(yǎng)器皿，使用抗生素或抗真菌藥物等。同時(shí)，也要注意實(shí)驗(yàn)室清潔和消毒，以預(yù)防細(xì)胞污染的發(fā)生。

  5、實(shí)驗(yàn)記錄

  準(zhǔn)確記錄培養(yǎng)細(xì)胞的信息，包括來源、處理方法、傳代次數(shù)及細(xì)胞密度等。這些記錄對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋和后續(xù)研究非常重要。

  上述是對(duì)原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些步驟進(jìn)行介紹，僅供參考！細(xì)節(jié)決定成敗，細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲，個(gè)個(gè)都是細(xì)胞殺手，在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)之前要了解注意事項(xiàng)，爭(zhēng)取把實(shí)驗(yàn)一次性做好。