【通蔚生物】: BCA法-總蛋白操作原理步驟

通蔚生物帶您了解BCA法-總蛋白是如何操作的有哪些原理呢？

原理BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上最常用蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性.檢測濃度下限達(dá)到25微克1毫升，最小檢測蛋白量達(dá)到0.5微克，待測樣品體積為120微升。

BCA法-總蛋白以下操作步驟
一.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:各管 按照下表加入試劑孔號01234567蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液( μL) 05 10 2040 6080 100去離子水( uL) 100 95 90 80 604020 0對應(yīng)蛋白含量( μg) 02.55.10.0 20.0 30.0 40.0 50.0
二.根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B ( 50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻：
三.各管充分混勻，37C放置 30分鐘，然后在562nm下比色測定。以蛋白含量( μg)為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線：
四.稀釋待測樣品至合適濃度，樣品稀釋液總體積為100 ul，加入bca工作液1000μL，充分混勻，37C放置 30分鐘后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號管做參比，在562nm波長下比色，記錄吸光值

BCA法-總蛋白先按說明書清點(diǎn)試劑盒里的試劑和物品，然后進(jìn)行標(biāo)曲稀釋和BCA工作液的配制，之后以血清樣本為例，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。整個過程包括標(biāo)曲稀釋，試劑準(zhǔn)備，樣本準(zhǔn)備，實(shí)驗(yàn)操作，儀器檢測以及數(shù)據(jù)處理。