PCR 和 qPCR 有什么區(qū)別？qPCR：實(shí)時(shí)定量 PCR 技術(shù)

  PCR和qPCR有什么區(qū)別？PCR可以實(shí)現(xiàn)DNA片斷擴(kuò)增，而qPCR具有實(shí)時(shí)定量擴(kuò)增的 DNA 片段，這就意味著qPCR 不僅可以告訴你某個(gè) DNA 片段是否存在，還可以告訴你它的數(shù)量有多少。如果您還不了解，沒(méi)關(guān)系，接下來(lái)上海通蔚將這些分子生物學(xué)概念更加巨像化，便于您的理解。

  什么是PCR？

  PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，由KaryMullis在20世紀(jì)80年代開(kāi)發(fā)，如今用于從少量DNA產(chǎn)生大量DNA。

  PCR通常是其他過(guò)程中使用的步驟，例如DNA測(cè)序、病原體檢測(cè)和凝膠電泳。PCR是一種重要的診斷技術(shù)，常用于病毒學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)、真菌學(xué)和牙科等領(lǐng)域。

  聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種用于制備DNA特定片段的多個(gè)副本的方法。這個(gè)過(guò)程從少量模板DNA開(kāi)始，然后通過(guò)稱(chēng)為聚合酶的酶進(jìn)行復(fù)制。通過(guò)重復(fù)加熱和冷卻循環(huán)可以增加復(fù)制的數(shù)量，這會(huì)分離DNA鏈，以便它們可以再次復(fù)制。

  PCR的最終產(chǎn)物是目標(biāo)DNA序列的大量相同副本。然后該產(chǎn)品可用于進(jìn)一步分析，例如測(cè)序或Southern印跡。PCR還可用于從mRNA模板分子制備cDNA。

  什么是qPCR？

  定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR或定量PCR）與PCR非常相似，但它還允許您量化樣品中存在的目標(biāo)DNA的量。qPCR涉及在擴(kuò)增過(guò)程中添加與目標(biāo)DNA結(jié)合的熒光染料或探針。當(dāng)這些探針被激光激發(fā)時(shí)，它們會(huì)發(fā)出不同波長(zhǎng)的光。

  通過(guò)測(cè)量每個(gè)波長(zhǎng)發(fā)出的光，您可以確定在擴(kuò)增開(kāi)始之前樣品中存在多少目標(biāo)DNA。qPCR還可用于通過(guò)測(cè)量熒光隨時(shí)間的增加來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增進(jìn)度。

  PCR和qPCR之間的差異

  PCR和qPCR之間的主要區(qū)別在于qPCR是實(shí)時(shí)方法，而PCR不是。這意味著通過(guò)qPCR，您可以實(shí)時(shí)監(jiān)控目標(biāo)DNA的擴(kuò)增情況。

  兩種方法之間的另一個(gè)區(qū)別是qPCR需要使用熒光染料或探針，而PCR則不需要。這些探針可讓您定量樣品中存在的目標(biāo)DNA的量。

  PCR通常用于擴(kuò)增DNA以進(jìn)行測(cè)序或其他下游應(yīng)用。

  qPCR通常用于檢測(cè)和定量RNA病毒。

  PCR和qPCR的應(yīng)用和用途

  聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

  PCR是一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單的過(guò)程，可以檢測(cè)DNA是否存在。PCR應(yīng)用于許多不同的領(lǐng)域，包括法醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)。它經(jīng)常用于擴(kuò)增小片段DNA以進(jìn)行測(cè)序或其他下游應(yīng)用。

  PCR還可用于從mRNA模板分子制備cDNA。

  定量PCR

  qPCR提供測(cè)量反應(yīng)速率的實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)，提供有關(guān)任何給定時(shí)間樣本中存在的DNA數(shù)量的信息，本質(zhì)上，它能夠測(cè)量基因表達(dá)速率。

  在分子生物學(xué)中，這有助于理解蛋白質(zhì)合成，從而有助于理解健康和疾病的生物途徑。實(shí)時(shí)或qPCR可用于檢測(cè)基因表達(dá)、病原體和RNA的存在和數(shù)量，以及驗(yàn)證DNA微陣列結(jié)果和環(huán)境應(yīng)用。

  qPCR具有高通量和更寬的動(dòng)態(tài)范圍的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樗梢栽谕豢變?nèi)檢測(cè)廣泛的表達(dá)水平。由于其多重功能，可以在同一實(shí)驗(yàn)中擴(kuò)增多個(gè)目標(biāo)、高通量和快速結(jié)果，因此運(yùn)行起來(lái)更加經(jīng)濟(jì)。

  用于PCR和qPCR的設(shè)備

  有許多不同類(lèi)型的設(shè)備可用于PCR和qPCR。最常見(jiàn)的設(shè)備類(lèi)型是熱循環(huán)儀，它用于加熱和冷卻樣品以使DNA擴(kuò)增發(fā)生。

  其他常見(jiàn)類(lèi)型的設(shè)備包括逆轉(zhuǎn)錄酶、熒光染料或探針以及激光器。根據(jù)您的具體應(yīng)用，您可能還需要其他類(lèi)型的設(shè)備。

  PCR和qPCR是許多不同領(lǐng)域中使用的重要方法。通過(guò)了解它們之間的主要區(qū)別，您可以為您的特定應(yīng)用選擇合適的方法。

  PCR和qPCR區(qū)別通蔚給大家介紹到這里。其實(shí)PCR和qPCR區(qū)別就在于qPCR 通過(guò)使用熒光染料或探針來(lái)實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和定量。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，qPCR 在 PCR 的基礎(chǔ)上增加了一個(gè)“計(jì)數(shù)器”，可以更精確地測(cè)量 DNA 擴(kuò)增的數(shù)量。其實(shí)它們之間擴(kuò)增原理和實(shí)驗(yàn)流程差別不大。也希望您通過(guò)學(xué)習(xí)和了解，在今后的PCR實(shí)驗(yàn)中增加更多樂(lè)趣和成果。