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發(fā)布時間：2024-03-25 發(fā)布作者：通蔚生物
ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定的簡稱，是一種非常成熟的檢測各種靶標(biāo)（量化蛋白質(zhì)、激素、抗體和其他分子）的方法。ELISA 的優(yōu)點(diǎn)之一是其執(zhí)行快速且簡單，因此通常用于診斷和研究目的。ELISA 涉及酶的使用以及抗體和抗原的特異性結(jié)合。根據(jù)其工作原理，ELISA 可分為四種主要類型：直接法、間接法、夾心法和競爭法。讓我們一一看看。
在直接 ELISA 中，僅使用酶標(biāo)記的一抗，這意味著不需要二抗。酶標(biāo)記的一抗“直接”與固定在板（固體表面）上的靶標(biāo)（抗原）結(jié)合。接下來，與一抗連接的酶與其底物反應(yīng)，產(chǎn)生可測量的可見信號。通過這種方式，檢測到感興趣的抗原。
圖1（直接elisa）
在間接 ELISA 中，同時使用一抗和二抗。但在這種情況下，一抗未用酶標(biāo)記。相反，二抗用酶標(biāo)記。一抗與固定在板上的抗原結(jié)合，然后酶標(biāo)二抗與一抗結(jié)合。最后，與二抗連接的酶與其底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可測量的可見信號。
圖2（間接elisa）
在直接和間接 ELISA 中，抗原固定在板上。然而，在夾心 ELISA 中，抗體被固定在板上，這種抗體稱為捕獲抗體。除捕獲抗體外，夾心ELISA還涉及檢測抗體的使用，一般包括未標(biāo)記的檢測一抗和酶標(biāo)的檢測二抗。
圖3（夾心elisa）
首先，目標(biāo)抗原與固定在板上的捕獲抗體結(jié)合。其次，一抗與抗原結(jié)合。第三，檢測二抗與檢測一抗結(jié)合，然后酶與其底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可測量的可見信號。
與上述三種ELISA類型相比，競爭性ELISA相對復(fù)雜，因?yàn)樗婕暗揭种苿┛乖氖褂茫虼烁偁幮?/span>ELISA也稱為抑制性ELISA。事實(shí)上，直接、間接和三明治這三種形式中的每一種都可以適應(yīng)競爭形式。在競爭性 ELISA 中，抑制劑抗原和目標(biāo)抗原競爭與一抗的結(jié)合。以下是競爭性 ELISA 的程序：
圖4（競爭elisa）
首先，將未標(biāo)記的一抗與含有目的抗原的樣品一起孵育，形成抗原抗體復(fù)合物（Ag-Ab）。在這一步中，抗體與抗原相比是過量的，因此還剩下游離的抗體。
其次，將 Ag-Ab 混合物添加到涂有抑制劑抗原的板中，該抗原也可以與一抗結(jié)合。混合物中的游離一抗與板上的抑制劑抗原結(jié)合，而混合物中的 Ag-Ab 復(fù)合物則不會結(jié)合，因此會被洗掉。
第三，將酶標(biāo)記的二抗添加到板中并與板上的抑制劑抗原結(jié)合的一抗結(jié)合。
最后，添加底物與酶反應(yīng)并發(fā)出可見信號以供檢測。
通過此過程，您可能會發(fā)現(xiàn)最終信號與樣品中感興趣的抗原的量成反比，這意味著樣品中的抗原越多，最終信號越弱。這是因?yàn)榕c樣品抗原結(jié)合的一抗將被洗掉，而留下的游離一抗將被固定在板上的抑制劑抗原捕獲并通過酶促反應(yīng)進(jìn)行測量。
這里描述的競爭性 ELISA 基于抗體捕獲，其中板涂有抗原。還有另一種基于抗原捕獲的競爭性 ELISA，其中板涂有未標(biāo)記的抗體。此外，競爭性ELISA一般使用標(biāo)記抗體進(jìn)行檢測，但有時也使用標(biāo)記抗原而不是標(biāo)記抗體。
直接、間接、夾心和競爭 ELISA 的比較
現(xiàn)在我們知道四種最常見的 ELISA 類型如何工作，但如何為您的實(shí)驗(yàn)選擇正確的類型呢？要找到答案，您需要了解每種 ELISA 類型的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)
表 1. 每種 ELISA 類型的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)
優(yōu)點(diǎn)
缺點(diǎn)
直接elisa
方案簡單、省時、省試劑。
與二抗無交叉反應(yīng)。
高背景。
無信號放大，因?yàn)閮H使用一抗，不需要二抗。
靈活性低，因?yàn)橐豢贡仨毐粯?biāo)記。
間接elisa
信號放大，因?yàn)橐环N或多種二抗可用于與一抗結(jié)合。
高靈活性，因?yàn)橄嗤亩箍捎糜诙喾N一抗。
與直接 ELISA 相比，方案更為復(fù)雜。
二抗的交叉反應(yīng)。
夾心elisa
高靈活性。
高靈敏度。
高特異性，因?yàn)椴煌目贵w結(jié)合相同的抗原進(jìn)行檢測。
感興趣的抗原必須足夠大，以便兩種不同的抗體可以在不同的表位處與其結(jié)合。
有時很難找到兩種不同的抗體來識別目標(biāo)抗原上的不同表位并以三明治形式很好地配合。
競爭elisa
高靈活性。
高靈敏度。
最適合檢測小抗原，即使它們的濃度較低。
協(xié)議相對復(fù)雜。
需要使用抑制劑抗原。
定量和定性 ELISA
根據(jù)ELISA能否定量目標(biāo)分子的水平，ELISA可分為定性和定量兩種。定性 ELISA 為樣品提供簡單的陽性或陰性結(jié)果，而定量 ELISA 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線反映樣品中目標(biāo)分子的濃度。因此，如果您想定量測定目標(biāo)分子水平，請選擇定量ELISA。
ELISA 可用于診斷和研究目的。ELISA檢測的疾病包括HIV、HBV、流感、溶血性貧血、萊姆病、食物過敏等。上海通蔚致力于提供高質(zhì)量、可靠的ELISA試劑盒，準(zhǔn)確、敏感、快速的檢測結(jié)果，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
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