蛋白質(zhì)免疫測定：認(rèn)識(shí)多克隆抗體和單克隆抗體

  為您的蛋白質(zhì)免疫測定找到合適的抗體可能具有挑戰(zhàn)性。一種抗體在某項(xiàng)測定中效果良好，但在另一種測定中可能無法發(fā)揮作用。因此，本文將為您提供有關(guān)兩種廣泛使用的抗體（單克隆抗體和多克隆抗體）之間差異的有用信息。此外，在您選擇抗體之前，我們還提供了一些注意事項(xiàng)。

  在本文中中你將了解到：

1.   什么是抗體？

2.   什么是單克隆抗體和多克隆抗體？

3.   單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別？

4.   單克隆抗體和多克隆抗體是如何產(chǎn)生的？

5.   單克隆抗體和多克隆抗體的用途是什么？

6.   如何選擇抗體

  什么是抗體？

  抗體是血液中免疫系統(tǒng)的蛋白質(zhì)成分，可識(shí)別細(xì)菌和病毒等入侵者?？乖钦T導(dǎo)免疫反應(yīng)激活（包括抗體產(chǎn)生）的外來物質(zhì)。而表位是抗體結(jié)合的抗原的一部分。

  

  在蛋白質(zhì)研究中，有兩種流行的抗體類型：單克隆抗體和多克隆抗體。

  什么是單克隆抗體和多克隆抗體？

  單克隆抗體是 針對(duì)抗原的單一表位的相同抗體群。

  

  多克隆抗體是 針對(duì)同一抗原內(nèi)許多表位的異質(zhì)抗體 群體。

  

  單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別？

  這兩類抗體的主要區(qū)別：

•   單克隆抗體

  單克隆抗體中的抗體群體是同質(zhì)的。

  它們識(shí)別抗原的單個(gè)表位。

  單克隆抗體的生產(chǎn)涉及動(dòng)物和雜交瘤細(xì)胞（源自脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的細(xì)胞）。

•   多克隆抗體

  多克隆抗體群體是異質(zhì)的。

  它們識(shí)別抗原中的多個(gè)表位。

  多克隆抗體的生產(chǎn)只需要?jiǎng)游铩?/span>

  單克隆抗體和多克隆抗體是如何產(chǎn)生的？

  單克隆抗體的生產(chǎn)首先向動(dòng)物注射抗原。幾周后，收集脾細(xì)胞并與骨髓瘤細(xì)胞融合。脾細(xì)胞產(chǎn)生抗體，但它們無法在培養(yǎng)物中生長。相反，在培養(yǎng)物中生長的骨髓瘤細(xì)胞無法產(chǎn)生抗體。兩種細(xì)胞融合后，選擇并培養(yǎng)雜交細(xì)胞，也稱為雜交瘤細(xì)胞，以產(chǎn)生相同的單克隆抗體。

  多克隆抗體是通過將特定抗原注射到動(dòng)物體內(nèi)來產(chǎn)生的。幾天后，動(dòng)物接受加強(qiáng)注射抗原，以產(chǎn)生大量針對(duì)該抗原的抗體。然后，收集或純化含有多克隆抗體的血清。

  

  單克隆抗體和多克隆抗體各有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？

•   單克隆抗體

  優(yōu)點(diǎn)：

  對(duì)單一表位具有高特異性

  交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)低

  批次間差異較小

  缺點(diǎn)

  抗原容易發(fā)生輕微變化

  昂貴的

  更多的時(shí)間來生產(chǎn)

•   多克隆抗體

  優(yōu)點(diǎn)：

  抗原不易發(fā)生輕微變化

  對(duì)目標(biāo)抗原具有高靈敏度和親和力

  更便宜

  快速生產(chǎn)

  缺點(diǎn)：

  交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)高

  容易出現(xiàn)批次差異

  單克隆抗體和多克隆抗體的用途是什么？

  單克隆抗體

  單克隆抗體具有高特異性，因此它們可用于一些需要對(duì)單個(gè)表位具有特異性的抗體的研究應(yīng)用。因此，生產(chǎn)治療性抗體是藥物開發(fā)的一種有吸引力的方法。

  單克隆抗體還可用于定量特定靶蛋白的水平；例如，在 ELISA 或放射免疫測定中。

  RELA單克隆抗體

  它們還可用于蛋白質(zhì)印跡 (WB)、免疫組織化學(xué) (IHC) 和免疫熒光測定 (IF)。然而，根據(jù)表位的不同，單克隆抗體也可能對(duì)這些方法無效。由化學(xué)物質(zhì)、pH 值或溫度引起的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化會(huì)影響單克隆抗體的效率。

  針對(duì)天然蛋白質(zhì)產(chǎn)生的單克隆抗體可以識(shí)別構(gòu)象表位或含有不連續(xù)氨基酸殘基的表位。因此，這些單克隆抗體可能無法識(shí)別靶蛋白變性狀態(tài)上的表位。

  

  不連續(xù)殘基是一級(jí)序列中相距較遠(yuǎn)，但折疊結(jié)構(gòu)中彼此接近的氨基酸。在這種情況下，選擇可以識(shí)別連續(xù)殘基或線性表位的單克隆抗體。否則，請(qǐng)考慮使用多克隆抗體。

  多克隆抗體

  多克隆抗體可用于許多一般研究應(yīng)用和診斷測定，因?yàn)樗鼈儗?duì)目標(biāo)抗原具有高親和力并且對(duì)目標(biāo)蛋白的微小變化具有耐受性，

  細(xì)胞色素c多克隆抗體

  多克隆抗體的應(yīng)用包括以下方法中的一種或多種：蛋白質(zhì)印跡、ELISA、免疫組織化學(xué)、免疫熒光測定和免疫沉淀 (IP)。

  如果針對(duì)變性抗原產(chǎn)生多克隆抗體，則多克隆抗體可識(shí)別變性狀態(tài)下靶蛋白的表位。測定過程中的處理，例如免疫組織化學(xué)過程中的福爾馬林固定，可以改變組織分子以形成交聯(lián)并掩蓋表位。因此，在蛋白質(zhì)印跡中表現(xiàn)良好的多克隆抗體可能無法在免疫組織化學(xué)中識(shí)別靶蛋白。

  多克隆抗體可能會(huì)導(dǎo)致交叉反應(yīng)和高背景噪音。因此，在進(jìn)行檢測時(shí)，必須包含良好的對(duì)照，例如蛋白質(zhì)印跡中的純化重組蛋白作為參考。

  在選擇之前，將抗體與檢測方法相匹配并研究其詳細(xì)信息，包括抗體的特異性。

  驗(yàn)證抗體特異性的一種方法是使用基因敲除 (KO) 驗(yàn)證。使用此方法驗(yàn)證的特定抗體通常不會(huì)在敲除細(xì)胞系的蛋白質(zhì)印跡上產(chǎn)生信號(hào)，但會(huì)在野生型細(xì)胞系的預(yù)期大小上產(chǎn)生良好的信號(hào)。

  如何選擇抗體

  檢查有關(guān)抗體類型和驗(yàn)證的信息。

  根據(jù)有關(guān)應(yīng)用的信息將抗體與您的蛋白質(zhì)檢測相匹配。

  當(dāng)檢測需要高特異性時(shí)，選擇單克隆抗體。

  選擇多克隆抗體進(jìn)行需要高靈敏度和親和力的檢測。

  考慮抗體的成本以及您的檢測所需的數(shù)量。例如，使用昂貴的抗體并運(yùn)行特定的測定（例如 ELISA）可能會(huì)變得過于昂貴。

  通過查找有關(guān)檢測中需要多少稀釋度的信息來檢查抗體的靈敏度。

  確保疊氮化鈉或 BSA 等添加劑與您在測定中使用的試劑兼容。

  在將抗體用于重要樣品之前，先用重組靶蛋白測試抗體。

  在蛋白質(zhì)檢測中包括陽性和陰性對(duì)照。