酶聯免疫技術 | 一文讀懂酶聯免疫試劑盒（ELISA)

ELISA試劑盒在國內有很多叫法，例如ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等...那么，elisa試劑盒是用來干什么的呢？ELISA試劑盒是一種常用的實驗室免疫分析技術，用于檢測各種生物分子，如抗體、抗原、蛋白質和細胞因子。ELISA試劑盒其高靈敏、可操作性高等優(yōu)勢廣泛應用于科研、醫(yī)療、食品及環(huán)境檢測等領域。下面上海通蔚生物詳細為大家介紹下酶聯免疫試劑盒原理、用途、種類、使用方法及購買指南。帶您全面了解ELISA試劑盒。

圖1 通蔚生物elisa試劑

  目錄：

  1.酶聯免疫試劑盒原理

  2.酶聯免疫試劑盒用途

  3.酶聯免疫試劑盒種類

  4.酶聯免疫試劑盒的使用方法

  5.酶聯免疫試劑盒選擇

  一、酶聯免疫試劑盒原理

ELISA是一種利用特異性抗體（或抗原）捕獲樣品中的目標抗原（或抗體），并利用酶與其底物的反應檢測/定量目標分子的方法。該方法原理是將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加入酶標記的二抗，形成酶標抗原-抗體復合物。當底物溶液加入到反應體系中時，底物在酶的催化下發(fā)生化學反應，產生顏色變化。通過檢測顏色變化，可以確定是否存在待檢測的抗原或抗體。根據其原理，該檢測又分為直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA、競爭性ELISA等。

圖2 為底物在酶的催化下發(fā)生化學反應，產生顏色變化

  二、酶聯免疫試劑盒用途

  Elisa試劑盒用于檢測各種生物分子，如抗體、抗原、蛋白質和細胞因子。其主要應用如下：

  1.抗體檢測：ELISA試劑盒可用于檢測體液中的特定抗體，如病毒抗體、抗細胞自身抗體等，對于疾病的診斷、感染的篩查以及免疫學研究非常重要。

  2.抗原檢測：試劑盒也可用于檢測樣品中的特定抗原，如病原體抗原、腫瘤標志物等，這在疾病的早期診斷、藥物治療監(jiān)測以及流行病學調查中具有重要意義。

  3.蛋白質檢測：試劑盒可用于定量檢測樣品中特定蛋白質的濃度，如細胞因子、酶類、激素等，對于生物學研究、臨床診斷和藥物研發(fā)等都具有重要的應用價值。

  4. 細胞因子檢測：試劑盒還可用于檢測樣品中的細胞因子，如白細胞介素、干擾素等，這對于炎癥反應的評估、免疫調節(jié)研究以及免疫治療監(jiān)測具有重要意義。

  除此之外，ELISA試劑盒還可以提供定量測定目標物質的濃度，通過與標準曲線的比較，可以獲得準確的目標物質濃度數據。這一特性使得其在藥物開發(fā)和藥物篩選、環(huán)境監(jiān)測、食品安全檢測、病毒學研究和植物學研究等領域都有廣泛的應用。

  三、酶聯免疫試劑盒種類

  ELISA試劑盒種類繁多，根據檢測目標分為，ELISA試劑盒的常見的種類：

  1、細胞因子檢測試劑盒：

  如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉化生長因子，趨化因子，細胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等等。

  2、肝纖維化檢測elisa試劑盒：

  如纖維連接蛋白，透明質酸，膠原，基質金屬蛋白酶抑制因子，基質金屬蛋白酶，層粘蛋白等。

  3、心肌檢測elisa試劑盒：

  如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應蛋白等等。

  4、內分泌檢測elisa試劑盒

  如甲狀腺,胰腺,性激素,孕酮,睪酮,生長激素,生長抑素,內皮素,皮質醇,骨鈣素,催乳素,促腎上腺皮質激素,促卵泡素,雌二醇，雌三醇，5-羥色胺，17-羥孕酮等。

  5、自身免疫檢測elisa試劑盒：

  如甲狀腺,鹽水可提取核抗原抗體(ENA),抗核抗體,DNA,抗心磷脂抗體,類風濕因子,循環(huán)免疫復合物,抗胰島細胞抗體,胰蛋白酶原,Sm,大皰性類皰瘡,蛋白酶,抗組蛋白抗體,粒細胞彈性蛋白酶,皮膚抗體,腎上腺抗體,腎小球基底膜,腎小球基底膜抗體,髓過氧化物酶,條紋肌抗體,網硬蛋白抗體,胃壁細胞抗體,胃蛋白酶,系統(tǒng)性紅斑狼瘡,細菌性滲透性增強因子等。

  6、標志物檢測elisa試劑盒：

  如腫瘤標志物，組織多肽抗原，腫瘤相關因子，胰腺癌，直腸癌，細胞角蛋白片段，胃腸癌，鐵蛋白，糖鏈抗原，神經異性稀醇化酶，上皮膜抗原，人抗小鼠抗體，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，大腸癌，肺癌，大小便隱血檢測，癌胚抗原，β-2。

圖3 通蔚白介素試劑盒

  四、酶聯免疫試劑盒的使用方法

  elisa試劑盒操作步驟：

   試劑準備

  1.使用前將所有試劑平衡至室溫。

  2.洗液：如果濃縮液中已經形成結晶，平衡至室溫，并輕輕地搖晃直到結晶*溶解。加入去離子水或蒸餾水稀釋20ml濃縮洗滌液至500ml。

  3.底物溶液：顯色試劑A和B應該在使用前15min以等體積混合。避光保存。每孔需要200ul生成的混合物。

  4.IL-6標準品：使用5ml標準稀釋液RD5T(適用于細胞培養(yǎng)上清液樣本)或標準稀釋液RD6F(適用于血清/血漿樣本)重新配制IL-6標準品。重新配制的產品為300pg/ml貯存液。稀釋前允許將標準品至少輕輕攪拌15min。

  5.吸取適當的標準稀釋液667ul到pg/mlEP管，500ul稀釋液到其它EP管中。適用貯存液配制一系列的稀釋液(如下)。進行下一次轉移前充分地混勻各個EP管。沒有稀釋的標準品作為高標準。適當的標準稀釋液作為0標準(0pg/ml)。

  注意：使用時戴眼睛、手、臉和衣服的防護。

  elisa試劑盒的注意事項：

  1.elisa試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

  3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

  4.elisa試劑盒請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

  5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號組分不得混用。

  10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

  五、酶聯免疫試劑盒選擇

  elisa試劑盒選擇對實驗結果準確性是至關重要的，在選購elisa試劑盒選擇可以從以下幾個方面來選擇：

  1.選擇靈敏度合適的試劑盒：靈敏度是檢測目標分子的最低濃度的能力。如果您需要檢測低濃度的目標分子，那么選擇高靈敏度的試劑盒是必要的。

  2.選擇特異性好的試劑盒：特異性是指試劑盒只對特定目標分子產生反應的能力。選擇特異性好的試劑盒可以避免假陽性結果。

  3.選擇有良好重復性的試劑盒：重復性是指相同樣本在不同時間或不同實驗室條件下得到相同結果的能力。選擇有良好重復性的試劑盒可以確保實驗結果的可靠性。

  4、選擇技術支持和服務商家：優(yōu)質品牌的試劑盒制造商通常提供全面的技術支持和服務，包括使用指導、售后服務等。這些支持可以幫助您更好地進行實驗操作，提高實驗效率。

  上海通蔚生物一直致力于研發(fā)生產高質量的科研試劑，對每一批產品實行嚴格的質控，嚴格控制批間差和批內差，為生命科學提供全面的免疫檢測相關產品！