夾心 ELISA法優(yōu)點(diǎn)和步驟詳解

  ELISA 主要有四種類型：直接 ELISA、間接 ELISA、夾心 ELISA 和競爭 ELISA。每個(gè)都有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和適用性。今天，上海通蔚生物帶大家認(rèn)識(shí)夾心ELISA試劑盒及步驟。詳細(xì)了解ELISA類型可以參考《ELISA 的類型》。

  夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是有效的實(shí)驗(yàn)室程序，有助于檢測樣品中目標(biāo)抗原的存在并測量其濃度。該測試用于計(jì)算兩層抗體（即捕獲抗體和檢測抗體）之間的抗原。在夾心 ELISA 中，兩種抗體在使用前必須配對(duì)并進(jìn)行測試。此外，在進(jìn)行夾心 ELISA 時(shí)，捕獲抗體和檢測抗體不得干擾彼此的結(jié)合能力。夾心 ELISA 的主要優(yōu)點(diǎn)之一是能夠特異性測量不純樣品中的抗原。三明治檢測的極其穩(wěn)健的性質(zhì)使其成為醫(yī)療目的的絕佳診斷工具，特別是用于識(shí)別潛在的食物過敏原或測試某些藥物。

  什么是夾心ELISA

  如前所述，該測試可用于識(shí)別和量化未知樣品中的抗原濃度。由于該測試的過程使用至少兩種抗體，因此待測量的抗原還必須具有至少兩個(gè)能夠與抗體結(jié)合的非重疊表位（抗原決定簇）。在夾心 ELISA 中，單克隆和多克隆抗體用作檢測和捕獲抗體。單克隆抗體用作檢測抗體，因?yàn)樗鼈冇兄诟鼫?zhǔn)確的檢測和定量，而；多克隆抗體被用作捕獲抗體，因?yàn)樗鼈冇兄诒M可能多地結(jié)合抗原。詳細(xì)了解單克隆和多克隆可以參考《蛋白質(zhì)免疫測定：認(rèn)識(shí)多克隆抗體和單克隆抗體》

  夾心elisa優(yōu)點(diǎn)

  夾心ELISA檢測有哪些優(yōu)點(diǎn)？

  夾心 ELISA 測試涉及使用兩種抗體。因此，在夾心 ELISA 的幫助下，可以更特異性地捕獲和檢測抗原。

  夾心 ELISA 測試更適合復(fù)雜的樣品，因?yàn)榭乖跍y量前不需要純化。

  夾心 ELISA 比直接和間接 ELISA 測試的靈敏度高 2 至 5 倍。它還可以快速、準(zhǔn)確地得出未知樣品中的抗原結(jié)果。

  在此可以使用直接和間接檢測方法，因此夾心ELISA具有良好的靈敏度和靈活性。

  夾心 ELISA 步驟

  第一步是用特定數(shù)量的捕獲抗體準(zhǔn)備表面（例如多孔板）。

  接下來，封閉表面上未結(jié)合的蛋白質(zhì)結(jié)合面，以減少背景和非特異性結(jié)合。

  之后，將含有目標(biāo)抗原的樣品添加到板中。應(yīng)允許靶抗原孵育，以便它可以與固定的捕獲抗體結(jié)合。

   洗滌，以除去未結(jié)合的抗原。

  接著，添加檢測抗體，同時(shí)確保它與捕獲抗體結(jié)合到抗原上的不同位置。  

  再次，孵育后，清洗板，以除去連接的未結(jié)合的抗體-酶。  

  在此步驟中，添加被酶改變顏色、電化學(xué)信號(hào)或熒光的底物?，F(xiàn)在測量多板孔上的熒光或電化學(xué)信號(hào)以確定抗原的存在和數(shù)量。