ELISAKIT的基本組成和操作流程

   elisa試劑盒對(duì)于搞科研的人來說還是比較神秘，elisa試劑盒來的時(shí)候就是一個(gè)盒子，這個(gè)盒子到底有什么神奇的地方呢？又有哪些部分組成？具體操作流程有哪些？下面跟隨上海生蔚一起來了解一下吧！

  ELISAKIT的基本組成

elisa試劑盒

  酶標(biāo)板：用于抗原-抗體復(fù)合物的孵育和洗滌。

  酶標(biāo)抗體：與待測(cè)樣本中的抗原特異性結(jié)合的抗體，通常采用辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記。

  酶標(biāo)二抗：與酶標(biāo)抗體結(jié)合的特異性抗體，用于增強(qiáng)信號(hào)。

  底物：用于顯色反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)，如TMB（四甲基聯(lián)苯胺）或ABTS（二氨基聯(lián)苯胺）。

  終止液：用于停止顯色反應(yīng)的液體，通常是硫酸。

  洗滌液：用于清洗酶標(biāo)板上的未結(jié)合物質(zhì)。

  說明書：包含操作指南和注意事項(xiàng)。

  ELISAKIT操作流程

elisa試劑盒操作步驟

  準(zhǔn)備工作：將所需試劑從冰箱中取出，恢復(fù)至室溫。準(zhǔn)備一塊干凈的酶標(biāo)板，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)設(shè)置合適的孔數(shù)和加樣位置。

  加樣：根據(jù)說明書要求，將待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品加入酶標(biāo)板上的相應(yīng)孔中。通常采用自動(dòng)加樣器或手工滴加。

  孵育：將酶標(biāo)板封閉后，在恒溫條件下孵育一定時(shí)間，使抗原-抗體復(fù)合物形成。

  洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的物質(zhì)。

  加酶標(biāo)抗體：將酶標(biāo)抗體加入酶標(biāo)板上的相應(yīng)孔中，封閉后再次孵育。

  洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。

  加底物：將底物加入酶標(biāo)板上的相應(yīng)孔中，孵育一定時(shí)間后顯色。

  終止反應(yīng)：用終止液停止顯色反應(yīng)。

  檢測(cè)：用酶標(biāo)儀讀取各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)并進(jìn)行分析。

  數(shù)據(jù)處理與分析：根據(jù)所得數(shù)據(jù)計(jì)算待測(cè)樣本的濃度或活性。可以參考說明書提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。

  結(jié)果報(bào)告：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?，撰寫?shí)驗(yàn)報(bào)告并提交結(jié)果。

  上海通蔚提醒，在使用ELISA試劑盒時(shí)，需要注意以下操作事項(xiàng)：

  仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，了解試劑盒的原理、操作步驟和注意事項(xiàng)。

  實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)保持清潔，避免污染試劑盒。

  所有試劑在操作前需要充分混勻，避免沉淀或分層。

  加樣時(shí)，應(yīng)按照說明書要求，使用自動(dòng)加樣器或手工滴加。

  孵育時(shí)間應(yīng)按照說明書要求進(jìn)行，以確?？乖?抗體復(fù)合物充分形成。

  洗滌要充分，每孔洗液加樣過少或殘留都會(huì)導(dǎo)致顯色過快，同時(shí)背景較高。

  手洗板時(shí)所用槍頭懸空加入洗液，避免洗液污染。

  剩余酶標(biāo)板條應(yīng)及時(shí)放入干燥袋，避免受潮。

  試劑盒保存條件應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行，過高的溫度或過低的冷藏溫度都會(huì)導(dǎo)致試劑盒敏感性下降。

上述是上海通蔚介紹的ELISA試劑盒的基本組成和操作流程，在操作試劑盒過程務(wù)必要注意事項(xiàng)，避免導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)過程導(dǎo)致讀數(shù)出現(xiàn)誤差。