elisa試劑盒是用來干什么的？一文了解ELISA試劑盒的作用及原理

  elisa試劑盒是用來干什么的?ELISA試劑盒，又稱酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）。ELISA是一種比較常用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，用于檢測(cè)和定量分析生物樣本中的蛋白質(zhì)和其他分子。它在科研、醫(yī)療、生物學(xué)和食品安全領(lǐng)域使用比較廣泛，你知道它們的原理和實(shí)驗(yàn)步驟嗎？上海通蔚帶您詳細(xì)了解一下。
  

    ELISA實(shí)驗(yàn)原理

  
    ELISA測(cè)定法通常在96或384微孔板中進(jìn)行。這些板被設(shè)計(jì)成通常通過直接吸附到微量滴定板的表面上或間接地通過預(yù)先包被的抗體間接地結(jié)合和固定抗原。固定后，將一抗引入樣品中，與抗原形成免疫復(fù)合物。一抗可以共價(jià)標(biāo)記到酶（例如HRP）上，或者如果一抗被生物素標(biāo)記，則一抗本身可以使用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體或鏈霉親和素偶聯(lián)物間接檢測(cè)。通過與合適的底物孵育來評(píng)估共軛酶的活性，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，該底物會(huì)產(chǎn)生可測(cè)量的副產(chǎn)物。
  
    Elisa檢測(cè)類分為4種類型，有直接elisa法、間接elisa法、夾心elisa法和競(jìng)爭(zhēng)elisa法。具體使用哪種方法可以結(jié)合自己可用的抗體、所需的結(jié)果或樣品的復(fù)雜性進(jìn)行調(diào)整。上述四種類型大家可以參考此篇文章《elisa試劑盒有哪幾種類型？elisa四類型圖解》。

圖1 elisa實(shí)驗(yàn)

  

    ELISA實(shí)驗(yàn)步驟

  
    在進(jìn)行elisa實(shí)驗(yàn)之前，要進(jìn)行充分的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備，在實(shí)驗(yàn)前咨詢閱讀說明書，了解實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)。其次，需要準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的試劑和設(shè)備，如酶標(biāo)板、抗體溶液、抗原溶液、洗滌液、酶標(biāo)底物等。
  
    第一步、抗原包被
  
    將抗原溶液加入酶標(biāo)板中，使其在酶標(biāo)板上形成一層薄薄的膜層?？乖坏臐舛群蜁r(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大影響，需要仔細(xì)控制。
  
    第二步、洗滌
  
    洗滌是ELISA實(shí)驗(yàn)中非常重要的一步，它可以去除未結(jié)合的抗原和抗體，減少背景噪音。洗滌時(shí)要保證酶標(biāo)板充分搖動(dòng)，確保每個(gè)孔都能清洗干凈。
  
    第三步、加樣
  
    將樣本和抗體溶液加入酶標(biāo)板中，讓它們與抗原結(jié)合。加樣時(shí)要保證每個(gè)孔的體積相同，避免出現(xiàn)誤差。
  
    第四步、孵育
  
    讓抗原和抗體在一定溫度下孵育一定時(shí)間，以便它們充分結(jié)合。孵育時(shí)間需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體情況而定，一般需要在37℃下進(jìn)行1-2小時(shí)。
  
    第五步、洗滌
  
    孵育結(jié)束后，再次進(jìn)行洗滌，去除未結(jié)合的抗體和抗原。洗滌時(shí)要保證每個(gè)孔都能清洗干凈，避免交叉污染。
  
    第六步、加酶標(biāo)物
  
    將酶標(biāo)物加入酶標(biāo)板中，讓它與抗體結(jié)合。加酶標(biāo)物時(shí)要保證每個(gè)孔的體積相同，避免出現(xiàn)誤差。
  
    第七步、顯色
  
    在酶的作用下，底物被氧化并釋放出色素，形成明顯的顏色變化。顯色時(shí)間需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體情況而定，一般需要在室溫下進(jìn)行30分鐘以上。
  
    第八步、終止反應(yīng)
  
    當(dāng)顏色變化達(dá)到最大程度時(shí)，需要加入終止液，停止酶的活性，防止底物過度反應(yīng)。
  
    第九步、檢測(cè)結(jié)果
  
    通過酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔的光密度值，計(jì)算出抗原或抗體的濃度。在檢測(cè)結(jié)果分析時(shí)，需要考慮到實(shí)驗(yàn)的特異性、靈敏度、重復(fù)性和準(zhǔn)確性等方面。

  

圖2.ELISA實(shí)驗(yàn)步驟圖

    ELISA應(yīng)用領(lǐng)域

  
    ELISA 測(cè)試有多種應(yīng)用，例如食品工業(yè)、疫苗開發(fā)、免疫學(xué)、診斷、毒理學(xué)、藥物監(jiān)測(cè)、制藥工業(yè)和移植。
  
    食品工業(yè)
  
    ELISA 在食品工業(yè)中發(fā)揮著重要作用。它是識(shí)別食物過敏原（例如牛奶、花生、核桃、杏仁和雞蛋中的過敏原）的主要平臺(tái)。 ELISA 還可用于證實(shí)食品的真實(shí)性。該技術(shù)對(duì)于避免冒充替代可能造成的經(jīng)濟(jì)損失有很大幫助。
  
    疫苗開發(fā)
  
    疫苗開發(fā)是 ELISA 的一個(gè)非常重要的應(yīng)用，它是 ELISA 過程的一個(gè)很好的候選者。可以測(cè)試來自免疫動(dòng)物或人類模型的血清樣本，以檢測(cè)是否存在針對(duì)故意注射到宿主體內(nèi)的某些類型抗原的抗體。
  
    免疫學(xué)
  
    身體的防御者，免疫系統(tǒng)，可以以細(xì)胞或體液（先天或適應(yīng)性）模式運(yùn)作。測(cè)量和監(jiān)測(cè)免疫反應(yīng)的變化是了解免疫疾病的基礎(chǔ)。各種研究已證明 ELISA 是此類測(cè)量和監(jiān)測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)方法，該方法快速且經(jīng)濟(jì)高效。
  
    體液免疫
  
    ELISA 在研究免疫系統(tǒng)對(duì)不同類別感染的體液反應(yīng)方面也顯示出巨大的潛力。體液免疫反應(yīng)涉及體液中存在的物質(zhì)（抗體和其他成分）。對(duì)這些組件的監(jiān)控和測(cè)量非常重要。
  
    診斷
  
    在診斷領(lǐng)域，ELISA 已被證明是一個(gè)在全球范圍內(nèi)應(yīng)用的強(qiáng)大平臺(tái)，可用于檢測(cè)人類和動(dòng)物的多種疾病類型。市場(chǎng)上有許多不同的商業(yè) ELISA 試劑盒可用于檢測(cè) HIV、流感、登革熱、埃博拉、恰加斯病、利什曼病、萊姆病、西尼羅河病毒等。即使在植物病理學(xué)中，ELISA 技術(shù)也越來越受到關(guān)注。 ELISA 成功克服了以前在植物診斷中進(jìn)行的血清學(xué)分析的缺點(diǎn)
  
    懷孕測(cè)試
  
    許多不同的生物分子實(shí)體，包括人絨毛膜促性腺激素（hCG）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌三醇（E3）和促甲狀腺激素（TSH）可以因懷孕而表達(dá)。 ELISA 可以在妊娠早期從母體血液、唾液或尿液中檢測(cè)到其中一些蛋白質(zhì)。 HCG 是常見的激素之一，可在受精后第一個(gè)月通過 ELISA 檢測(cè)到。另一種與妊娠相關(guān)的生物分子是雌三醇 (E3)，可在妊娠第 6 周時(shí)通過唾液中的 ELISA 檢測(cè)到。
  
    癌癥檢測(cè)
  
    高度靈敏的癌癥檢測(cè)提供了早期診斷，這對(duì)于患者的生存至關(guān)重要。然而，癌癥生物標(biāo)志物是作為目標(biāo)分析物最具挑戰(zhàn)性的生物分子實(shí)體之一。 ELISA 技術(shù)的進(jìn)步有望應(yīng)用于癌癥生物標(biāo)志物的檢測(cè)。

  

    ELISA優(yōu)勢(shì)和局限性

  
    1.優(yōu)勢(shì)：
  
    （1）靈敏度高：ELISA試劑盒的檢測(cè)靈敏度較高，能夠檢測(cè)出低濃度的抗原或抗體。
  
    （2）特異性好：由于采用了抗原-抗體反應(yīng)的原理，ELISA試劑盒具有很好的特異性，能夠區(qū)分不同抗原或抗體的差異。
  
    （3）操作簡(jiǎn)便：ELISA試劑盒的操作相對(duì)簡(jiǎn)單，易于標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化。
  
    （4）適用范圍廣：ELISA試劑盒可以用于各種不同樣品類型的檢測(cè)，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等。
  
    2.局限性：
  
    （1）假陽(yáng)性問題：由于抗原-抗體反應(yīng)的交叉反應(yīng)性，ELISA試劑盒有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
  
    （2）非特異性結(jié)合：樣品中的非特異性物質(zhì)可能與抗體或抗原發(fā)生結(jié)合，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。
  
    （3）不同樣品間的差異：不同樣品來源的抗原或抗體可能存在差異，影響ELISA試劑盒的檢測(cè)結(jié)果。
  
    上述是通蔚為大家介紹了elisa試劑盒是用來干什么的，了解elisa原理、步驟及應(yīng)用。相信你對(duì)ELISA試劑盒有所了解，ELISA試劑盒應(yīng)用比較廣泛及自身優(yōu)勢(shì)成為實(shí)驗(yàn)室主流檢測(cè)技術(shù)。上海通蔚生物是一家科研和銷售科學(xué)試劑產(chǎn)品，有人elisa試劑盒、動(dòng)植物elisa試劑盒，如果想進(jìn)一步了解elisa試劑盒，歡迎前來咨詢我們?cè)诰€顧問。