從零到一：ELISA試劑盒實驗步驟完全指南

  ELISA試劑盒實驗步驟。大家在操作實驗過程中，通常包括包被、封閉、洗滌、加入酶標抗體和顯色液等。針對上述步驟，小蔚為大家一一詳細介紹。

  第一步包被。把抗原和共享載體結(jié)合起來，之后就是比較重要一步就是洗滌，在整個ELISA實驗過程相對來說比較重要的一步，每一次操作中間都要洗滌。洗滌液一般是緩沖液，里面加上吐溫，土溫是去污劑，可以有效把沒有結(jié)合的物質(zhì)洗掉。

  第二部是封閉。就是固相材體就相當于一個非常大的空間，抗原只是結(jié)合了其中非常少的一部分，其他地方還有很多待結(jié)合的位點，需要用到雜蛋白去把這些位點全部都覆蓋起來，才能不讓一抗和二抗與空白的位點結(jié)合。

  第三步是洗滌。封閉之后，還要把多余的蛋白洗滌之后，就可以進行加樣，把待檢抗體加進體系中，讓待檢抗體和包在固項載體上的抗原進行待異性的結(jié)合。把多余的待檢測抗體洗滌之后，就會得到這樣的抗原和抗體結(jié)合的復合物。

  第四步是加入酶標二抗。這部分抗體屬于一抗的FC端結(jié)合的抗體，同時還帶著酶標記，所以它是起到兩種作用。把多余的二抗洗滌之后，就會形成一種二抗、一抗和待檢測抗原的還有酶的復合物。

  最后就是加入顯色液?？梢宰屗a(chǎn)生顏色的反應。終止之后一般是加入氫氧根或者酸根離子，就是鹽酸或者氫氧化鈉去終止整個反應，這就是ELISA實驗過程。

  接下來就是拿酶標語上去讀數(shù)，得到最終把它量化的儀器叫做酶標語，就是專門去作為讀數(shù)用的。一般來說現(xiàn)在用鹽酸中指的波長反應是450納米，去對它進行讀數(shù)，最后對結(jié)果進行量化的體現(xiàn)。

  在ELISA過程中，要注意以下幾點：

  第一點是包被液的選擇。包被液就是把抗原包被在固相載體上的稀釋液S包，一般是兩種，一種是PBS，最常用的兩種是PBS和CPS，其中這兩個里面就更常用則是PBS。

  第二點是包被溫度的選擇。一般來說這邊都是4度條件下，4度調(diào)一下包被過夜或者37度保溫2小時，37度反應會更快一點，但是反應效果一般是沒有4度是好的，所以剪映是4度條件下包被。

  第三點是包被濃度的選擇。包被濃度是根據(jù)實驗效果、實驗條件還有包被物質(zhì)的性質(zhì)去改變的。一般來說包被濃度推薦是1-5微克每毫升。

  上述是elisa試劑盒實驗步驟及注意事項，在elisa實驗過程嚴格遵循說明書和注意事項，實驗結(jié)果也會更加精確。