ELISA實驗常見樣本—細(xì)胞

  在科研實驗，ELISA進(jìn)行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等。今天由上海通蔚生物來介紹一下樣本細(xì)胞。

  細(xì)胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。

•   如果目的物所是分泌型，存在于細(xì)胞之外的話，即可選擇細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。
•   胞培養(yǎng)上清處理方法：取細(xì)胞培養(yǎng)上清，1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

  目的物是存在于細(xì)胞內(nèi)，則建議選擇細(xì)胞裂解液作為樣本。細(xì)胞裂解液處理方法如下：

1.   貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；
2.   將收集到的細(xì)胞用冷PBS洗3次；
3.   物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：
4.   超聲破碎：取適量PBS重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂；
5.   反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20℃以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細(xì)胞溶脹破碎；
6.   將標(biāo)本于2-8度1500×g離心10分鐘，收集上清備用。

  細(xì)胞裂解液處理過程中，物理方法更優(yōu)異于化學(xué)方法，化學(xué)方法會引入酸或堿，可能會對ELISA實驗產(chǎn)生影響。利用化學(xué)的細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測效果，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

  樣本保存事項：

  在處理樣本過程就是收集目標(biāo)蛋白，由于這些目標(biāo)蛋白容易變性，降解，該過程要盡量的溫和。贗本處理之后存儲也非常重要，不要反復(fù)凍融，處理后的樣本盡量密封保存，保存溫度在4°保存要小于一周，-20°保存要小于1個月，-80°保存要小于2個月。

  上述是上海通蔚為大家介紹ELISA實驗常見樣本細(xì)胞處理方法，希望對大家有所幫助！上海通蔚生物有ELISA試劑盒，靈敏度高，易用受廣大科研者青睞，歡迎選購。