ELISA 實驗必備：細說6種關鍵試劑的作用

  ELISA實驗會用到哪些試劑？在ELISA中常用到的試劑包括包被液 、封閉液、洗滌緩沖液、樣品稀釋液 、酶標抗體、底物和終止液。接下來，上海通蔚就elisa實驗所需試劑詳細說明。

  在介紹試劑之前，我們先簡單了解下elisa基本原理。elisa基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應，將待測樣品中的抗原或抗體與酶標記的抗體或抗原結(jié)合，再通過洗滌和顯色等步驟，對待測樣品中的抗原或抗體進行定量或定性分析。詳情ELISA檢測試劑盒，可以參考《ELISA檢測試劑盒：原理、步驟和操作指南》

  包被液。Elisa實驗第一步就是包被，即將抗原或抗體固定在酶標板上，以便后續(xù)的抗原抗體反應。包被液用于將抗原或抗體吸附到酶標板上，通常是碳酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液。包被液作用：

  1、提供合適的pH和離子強度環(huán)境:包被液通常是碳酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液，可以提供合適的pH和離子強度環(huán)境，促進蛋白質(zhì)與聚苯乙烯表面的結(jié)合。

  2、提高蛋白吸附效率:一些包被液中可能含有額外的成分，例如蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑或表面活性劑，可以進一步提高蛋白質(zhì)的吸附效率和穩(wěn)定性。

  封閉液。在包被之后，立即使用效果較好的封閉液（如細胞培養(yǎng)級BSA、Tween等）封閉非特異性抗體。用于封閉酶標板上未被抗原或抗體占據(jù)的位點，減少非特異性結(jié)合。

  洗滌緩沖液。用于洗去未結(jié)合的物質(zhì)，降低背景信號，讓您的信號更加清晰，通常是 PBS (磷酸鹽緩沖液) 或 Tris 緩沖液，可能含有 Tween-20 等去污劑?？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是最主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。

  酶標抗體。在elisa實驗中，與目標抗原或抗體特異性結(jié)合，并帶有酶標記，例如辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)。

  底物。與酶標抗體上的酶反應，酶會催化底物發(fā)生反應，產(chǎn)生可檢測的信號，例如顏色變化或發(fā)光。通過檢測信號的強度，我們可以定量樣品中的目標蛋白（抗原或抗體）。

  終止液。用于終止酶-底物反應，例如酸性溶液或 EDTA 溶液。終止液有兩方面作用：一是終止液破壞了HRP酶的活性，使酶的催化功能喪失，中止反應，使得讀數(shù)相對穩(wěn)定，輕易控制；

  二是終止液使酶失活的同時，使得pH降低，顯色底物的特征吸收波長發(fā)生變化，即可使藍色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，聯(lián)苯醌在波長450nm處有最大消光系數(shù)。

  ELISA試劑盒保存方法

  ELISA是一種靈敏的檢測方法，用于檢測樣品中特定抗原或抗體的存在。為了保持ELISA試劑盒的穩(wěn)定性和準確性，正確的保存方法非常重要。以下是ELISA試劑盒保存方法的一些建議：

  1.避免反復凍融

  ELISA試劑盒中包含的酶標板和試劑應避免反復凍融。反復凍融會破壞酶的活性，導致檢測結(jié)果不準確。因此，在儲存過程中，應將ELISA試劑盒放在冰箱冷凍室中，使用時取出，并在室溫下融化。

  2.低溫保存

  ELISA試劑盒中的酶標板和試劑應在低溫下保存。通常建議將它們保存在2-8℃的冰箱中。低溫可以保持酶的活性和穩(wěn)定性，延長試劑盒的保質(zhì)期。

  3.干燥保存

  ELISA試劑盒中的酶標板和試劑應避免潮濕。過高的濕度會導致酶標板變形、變質(zhì)，影響檢測結(jié)果。因此，在儲存過程中，應將ELISA試劑盒放在干燥、通風的地方，避免直接暴露在空氣中。

  4.避免陽光直射

  ELISA試劑盒中的酶標板和試劑應避免陽光直射。陽光中的紫外線會破壞酶的活性，導致檢測結(jié)果不準確。因此，在儲存過程中，應將ELISA試劑盒放在避光的地方，如抽屜或柜子里。

  5.按說明書要求儲存

  不同廠家生產(chǎn)的ELISA試劑盒可能有不同因的此儲，存在要使求用。試劑盒前，應仔細閱讀說明書，了解該試劑盒的儲存方法和注意事項。嚴格按照說明書的要求進行儲存可以保證試劑盒的穩(wěn)定性和準確性。

  上述ELISA試劑實現(xiàn)了ELISA檢測的準確性和可靠性。了解ELISA檢測試劑盒的組成部分及其作用有助于更好地理解和應用該技術在科研領域的重要性。