抗體選擇：如何區(qū)分好抗體和壞抗體

  抗體是多種免疫測定技術(shù)必不可少的工具。然而，為了使抗體產(chǎn)生可靠的數(shù)據(jù)，它們應(yīng)該對目標物種和應(yīng)用中的目標分析物具有經(jīng)過證實的特異性。

  抗體是不可或缺的研究試劑

  抗體具有在存在許多其他生物分子的情況下識別和結(jié)合目標分析物的獨特能力，是科學(xué)研究不可或缺的工具。根據(jù)其應(yīng)用，抗體可以提供靶標量化，識別細胞和組織中蛋白質(zhì)表達的空間和時間模式，甚至監(jiān)測結(jié)合事件以確定生物相互作用如何影響細胞行為。雖然傳統(tǒng)的多克隆抗體和單克隆抗體在研究人員中仍然很受歡迎，但重組抗體的使用率有所提高，因為它們具有出色的批次間一致性，并且相對容易被設(shè)計成不同的形式。此外，抗體片段和合成免疫試劑（如適體和非免疫球蛋白支架）正被研究人員越來越廣泛地使用。

  抗體被歸咎為可重復(fù)性危機的根源

  近年來，用于科學(xué)研究的抗體試劑的質(zhì)量受到質(zhì)疑。2008年的一篇《分子與細胞蛋白質(zhì)組學(xué)》出版物報道稱，在獨立測試中，只有49%的商業(yè)抗體能夠準確檢測到其蛋白質(zhì)靶標，而2015年的一篇開創(chuàng)性《自然》文章則指出抗體是造成可重復(fù)性危機的主要因素——人們越來越意識到許多科學(xué)實驗的結(jié)果無法重復(fù)(1,2)?？紤]到實驗經(jīng)?；谄渌麑嶒炇业墓ぷ髟O(shè)計，因此由于抗體性能不穩(wěn)定、不必要的交叉反應(yīng)或用于錯誤的應(yīng)用等因素而導(dǎo)致的不可重復(fù)性是一個嚴重的問題。這導(dǎo)致制造商驗證抗體的方式以及選擇用于研究的產(chǎn)品的方式發(fā)生了轉(zhuǎn)變。

  抗體驗證的五大支柱有望提高可重復(fù)性

  為了解決可重復(fù)性危機，由瑞典皇家理工學(xué)院MathiasUhlen領(lǐng)導(dǎo)的研究小組于2016年召集了一個特設(shè)的抗體驗證國際工作組(IWGAV)，以定義驗證常見研究應(yīng)用中使用的抗體的最佳實踐。值得注意的是，IGFAW建議抗體驗證遵循以下五大支柱，并建議至少將其中之一納入抗體測試流程，以支持特定應(yīng)用的驗證要求 。

  1.遺傳策略

  遺傳策略涉及比較表達靶蛋白的樣本與靶蛋白表達已被基因組編輯或RNA干擾消除或顯著降低的樣本之間的抗體結(jié)合活性。敲除(KO)細胞系通常用于此類研究。

  2.正交策略

  正交驗證是將基于抗體的目標檢測與不依賴抗體的方法進行比較的過程。后者的例子包括質(zhì)譜(MS)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和原位雜交。

  3.獨立抗體策略

  獨立抗體策略直接將正在評估的抗體與針對同一靶標進行驗證的另一種抗體進行比較。對于這種類型的驗證，兩種抗體具有不重疊表位至關(guān)重要。

  4.標記蛋白的表達

  使用融合標簽表達目標蛋白可以將抗體信號與標簽特異性抗體的信號進行比較。這種方法的局限性在于，加入標簽可能會改變目標蛋白的特性。

  應(yīng)用抗體驗證原則

  抗體驗證的五大支柱受到了科學(xué)界的熱烈歡迎。許多抗體制造商已將這些支柱納入其現(xiàn)有的驗證流程，而研究人員也越來越傾向于尋找已進行此類測試的證據(jù)。選擇抗體時，建議您查看產(chǎn)品數(shù)據(jù)表，以獲取實驗證明該抗體適用于您選擇的物種、樣品類型和應(yīng)用。您的購買決定還可能受到有關(guān)抗體的其他信息的指導(dǎo)，例如用于抗體生產(chǎn)的免疫原、同種型和緩沖液配方的詳細信息，以及用于驗證目的的方案。至關(guān)重要的是，在使用您選擇的抗體試劑時，您應(yīng)該始終在每次進行的實驗中包含陽性和陰性對照。