10分鐘帶您認(rèn)識(shí)“elisa檢測(cè)試劑盒？”

  ELISA中文全稱“酶聯(lián)免疫分析”。ELISA試劑盒用途非常廣泛，比如常見的醫(yī)學(xué)臨床診斷，我們近年來(lái)常見的艾滋病、非典、新冠等病毒發(fā)揮著巨大的作用。不僅如此，常規(guī)的血檢、尿檢、藥檢和過(guò)敏原檢測(cè)都是ELISA強(qiáng)項(xiàng)。今天，帶大家認(rèn)識(shí)一下什么是ELISA檢測(cè)試劑盒。

  ELISA在1971年被Engvall和Perlmann發(fā)明，是一種利于酶聯(lián)免疫法來(lái)定量檢測(cè)液體樣品中目標(biāo)物質(zhì)濃度的生物化學(xué)方法。

  抗原反應(yīng)

  B細(xì)胞在獲得性免疫過(guò)程中，活化的B細(xì)胞會(huì)成為漿細(xì)胞和記憶B細(xì)胞，而漿細(xì)胞則會(huì)產(chǎn)出“Y”形的抗體蛋白來(lái)與異物抗原進(jìn)行特異性的結(jié)合，起到標(biāo)記和消滅抗原的目的。

  對(duì)于抗體抗原反應(yīng)的準(zhǔn)確描述要到1950年（代）才被Wisconsion大學(xué)的Goldberg提出隨著人們認(rèn)識(shí)到抗原和抗體的結(jié)合就像鑰匙與鎖一樣具有特異性。免疫法開始成為生物化學(xué)和醫(yī)學(xué)界的一種檢測(cè)手段。

  抗體產(chǎn)生

  科學(xué)家把需要檢測(cè)的特殊抗原注射到動(dòng)物體內(nèi)，讓動(dòng)物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體，然后把動(dòng)物產(chǎn)生的抗體收集起來(lái)，就可以對(duì)未知樣品中的抗原進(jìn)行檢測(cè)。在酶聯(lián)免疫發(fā)明之前，科學(xué)家和醫(yī)生有兩種方式來(lái)使用免疫法

  1.免疫沉淀。一種是在特定的溶液中讓抗原和抗體結(jié)合產(chǎn)生免疫沉淀。

  2.放射性免疫標(biāo)記。另一種是使用放射性的抗原和抗體進(jìn)行放射性的免疫標(biāo)記。這兩種方法的局限性非常明顯。

  缺點(diǎn)：第一種只能定性而不能定量，第二種則對(duì)人體有顯著的危害！

  1960年代后期，酶被應(yīng)用到免疫測(cè)定方法。使用酶來(lái)代替放射性的方法被開發(fā)出來(lái)。使的的免疫測(cè)定不再對(duì)人體產(chǎn)生危害!1971年ELISA正式問(wèn)世，就因?yàn)樗?jiǎn)單小巧而又準(zhǔn)確，立刻成為主流。

ELISA試劑盒

  今天我們接觸到的ELISA已經(jīng)得到了大幅度的優(yōu)化，甚至改變一些重要的技術(shù)原理，人們依然把這些方法稱為ELISA，也是對(duì)這個(gè)極其巧妙的生化檢測(cè)方法一種敬仰。

  如果評(píng)選一種最簡(jiǎn)單、應(yīng)用最廣泛、結(jié)果最準(zhǔn)確，并且價(jià)格最親們的生化檢測(cè)方法，一定會(huì)為elisa投上一票。

  Elisa生化原理

  含有代測(cè)抗原的溶液被加入到塑料制的多孔板中并靜置一段時(shí)間，在這段時(shí)間里，抗原由于靜電的作用、疏水作用、范德華力被物理吸附在多孔板中，吸附結(jié)束后，我們就會(huì)吸去沒(méi)有吸附的溶液部分。

  再加入不會(huì)和抗原起反應(yīng)的蛋白溶液，比如牛血清白蛋白（BSA）來(lái)封閉多孔板中，沒(méi)有被覆蓋的區(qū)域。這樣，之后加入了蛋白質(zhì)就不會(huì)由于物理吸附殘留在多孔板里。

  完成封閉后，我們就可以加入特異性識(shí)別待測(cè)抗原的抗體，在這些抗體上，我們事先鏈接上了可以催化變色的反應(yīng)的酶。洗去沒(méi)有特異性結(jié)合的抗體之后我們就加入顯色底物由鏈接的酶催化顯色反應(yīng)，最終我們通過(guò)分光計(jì)來(lái)測(cè)量每個(gè)樣品中的顯色程度，從而判斷原始抗原的濃度。

  在這個(gè)基礎(chǔ)版的elisa有一個(gè)明顯的問(wèn)題，就是物理吸附階段特異性還有偏差，在物理吸附過(guò)程，抗原蛋白需要和其它蛋白競(jìng)爭(zhēng)來(lái)進(jìn)行物理吸附，導(dǎo)致溶液雜質(zhì)蛋白成為一個(gè)干擾項(xiàng)。而在定量過(guò)程就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)偏差，為了解決這個(gè)問(wèn)題，我們只需要把第一步的物理吸附改為特異性吸附，這就成為如今主流的ELISA方法——三明治法

  在三明治法中，多孔板先被針對(duì)代測(cè)的抗原進(jìn)行預(yù)處理，定量包埋封閉上特異性抗體，這樣處理之后，加入待測(cè)溶液的時(shí)候，抗原就不在和雜質(zhì)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)。而是直接被吸附于預(yù)先包埋的抗體上，后續(xù)的檢測(cè)完全不變。三明治法非常簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性也很高。因此，很快成為實(shí)驗(yàn)室以及臨床檢測(cè)中的主流方法之一。

  這種方法最大的缺點(diǎn)則是，針對(duì)待測(cè)的抗原，我們需要生產(chǎn)兩種結(jié)合在不同位點(diǎn)的特異性抗體，如果代測(cè)抗原不主流、沒(méi)有兩種好用的抗體，就難以檢測(cè)。另外還有一個(gè)小缺點(diǎn)就是有時(shí)候會(huì)出現(xiàn)兩種抗體的非特異性結(jié)合，從而產(chǎn)生假陽(yáng)性。

  因此必須有非常嚴(yán)謹(jǐn)?shù)年幮詫?duì)照來(lái)確保結(jié)果的有效性。如果我們沒(méi)有兩種好的抗體來(lái)使用三明治法，還有一種常用的elisa方法，就是競(jìng)爭(zhēng)法。

  競(jìng)爭(zhēng)法ELISA（也稱抑制或封閉法ELISA）通過(guò)定量某種樣品分析物對(duì)預(yù)計(jì)信號(hào)的干擾，來(lái)測(cè)定該分析物在樣品中的含量，可通過(guò)以下方式進(jìn)行：微孔板用一種分析物或一種對(duì)靶標(biāo)分析物具有特異性的抗體包被（即直接法和間接法），再添加一種有部分某種檢測(cè)的靶標(biāo)分析物，以競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體上的位點(diǎn)。信號(hào)與分析物含量呈負(fù)相關(guān)，因此，如果靶標(biāo)分析物的濃度較分析物高，靶標(biāo)分析物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合有限量的標(biāo)記抗體，參考信號(hào)將會(huì)較靶標(biāo)分析物的濃度較低的情況增強(qiáng)。

  上文為大家介紹的ELISA檢測(cè)試劑盒，分別從ELISA歷史、抗原抗體反應(yīng)、ELISA原理及ELISA方法介紹，也希望上述內(nèi)容對(duì)大家有所幫助！