10分鐘帶您認識“elisa檢測試劑盒？”

  ELISA中文全稱“酶聯(lián)免疫分析”。ELISA試劑盒用途非常廣泛，比如常見的醫(yī)學臨床診斷，我們近年來常見的艾滋病、非典、新冠等病毒發(fā)揮著巨大的作用。不僅如此，常規(guī)的血檢、尿檢、藥檢和過敏原檢測都是ELISA強項。今天，帶大家認識一下什么是ELISA檢測試劑盒。

  ELISA在1971年被Engvall和Perlmann發(fā)明，是一種利于酶聯(lián)免疫法來定量檢測液體樣品中目標物質濃度的生物化學方法。

  抗原反應

  B細胞在獲得性免疫過程中，活化的B細胞會成為漿細胞和記憶B細胞，而漿細胞則會產(chǎn)出“Y”形的抗體蛋白來與異物抗原進行特異性的結合，起到標記和消滅抗原的目的。

  對于抗體抗原反應的準確描述要到1950年（代）才被Wisconsion大學的Goldberg提出隨著人們認識到抗原和抗體的結合就像鑰匙與鎖一樣具有特異性。免疫法開始成為生物化學和醫(yī)學界的一種檢測手段。

  抗體產(chǎn)生

  科學家把需要檢測的特殊抗原注射到動物體內，讓動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體，然后把動物產(chǎn)生的抗體收集起來，就可以對未知樣品中的抗原進行檢測。在酶聯(lián)免疫發(fā)明之前，科學家和醫(yī)生有兩種方式來使用免疫法

  1.免疫沉淀。一種是在特定的溶液中讓抗原和抗體結合產(chǎn)生免疫沉淀。

  2.放射性免疫標記。另一種是使用放射性的抗原和抗體進行放射性的免疫標記。這兩種方法的局限性非常明顯。

  缺點：第一種只能定性而不能定量，第二種則對人體有顯著的危害！

  1960年代后期，酶被應用到免疫測定方法。使用酶來代替放射性的方法被開發(fā)出來。使的的免疫測定不再對人體產(chǎn)生危害!1971年ELISA正式問世，就因為它簡單小巧而又準確，立刻成為主流。

ELISA試劑盒

  今天我們接觸到的ELISA已經(jīng)得到了大幅度的優(yōu)化，甚至改變一些重要的技術原理，人們依然把這些方法稱為ELISA，也是對這個極其巧妙的生化檢測方法一種敬仰。

  如果評選一種最簡單、應用最廣泛、結果最準確，并且價格最親們的生化檢測方法，一定會為elisa投上一票。

  Elisa生化原理

  含有代測抗原的溶液被加入到塑料制的多孔板中并靜置一段時間，在這段時間里，抗原由于靜電的作用、疏水作用、范德華力被物理吸附在多孔板中，吸附結束后，我們就會吸去沒有吸附的溶液部分。

  再加入不會和抗原起反應的蛋白溶液，比如牛血清白蛋白（BSA）來封閉多孔板中，沒有被覆蓋的區(qū)域。這樣，之后加入了蛋白質就不會由于物理吸附殘留在多孔板里。

  完成封閉后，我們就可以加入特異性識別待測抗原的抗體，在這些抗體上，我們事先鏈接上了可以催化變色的反應的酶。洗去沒有特異性結合的抗體之后我們就加入顯色底物由鏈接的酶催化顯色反應，最終我們通過分光計來測量每個樣品中的顯色程度，從而判斷原始抗原的濃度。

  在這個基礎版的elisa有一個明顯的問題，就是物理吸附階段特異性還有偏差，在物理吸附過程，抗原蛋白需要和其它蛋白競爭來進行物理吸附，導致溶液雜質蛋白成為一個干擾項。而在定量過程就會出現(xiàn)一個偏差，為了解決這個問題，我們只需要把第一步的物理吸附改為特異性吸附，這就成為如今主流的ELISA方法——三明治法

  在三明治法中，多孔板先被針對代測的抗原進行預處理，定量包埋封閉上特異性抗體，這樣處理之后，加入待測溶液的時候，抗原就不在和雜質進行競爭。而是直接被吸附于預先包埋的抗體上，后續(xù)的檢測完全不變。三明治法非常簡單，準確性也很高。因此，很快成為實驗室以及臨床檢測中的主流方法之一。

  這種方法最大的缺點則是，針對待測的抗原，我們需要生產(chǎn)兩種結合在不同位點的特異性抗體，如果代測抗原不主流、沒有兩種好用的抗體，就難以檢測。另外還有一個小缺點就是有時候會出現(xiàn)兩種抗體的非特異性結合，從而產(chǎn)生假陽性。

  因此必須有非常嚴謹?shù)年幮詫φ諄泶_保結果的有效性。如果我們沒有兩種好的抗體來使用三明治法，還有一種常用的elisa方法，就是競爭法。

  競爭法ELISA（也稱抑制或封閉法ELISA）通過定量某種樣品分析物對預計信號的干擾，來測定該分析物在樣品中的含量，可通過以下方式進行：微孔板用一種分析物或一種對靶標分析物具有特異性的抗體包被（即直接法和間接法），再添加一種有部分某種檢測的靶標分析物，以競爭結合抗體上的位點。信號與分析物含量呈負相關，因此，如果靶標分析物的濃度較分析物高，靶標分析物競爭性結合有限量的標記抗體，參考信號將會較靶標分析物的濃度較低的情況增強。

  上文為大家介紹的ELISA檢測試劑盒，分別從ELISA歷史、抗原抗體反應、ELISA原理及ELISA方法介紹，也希望上述內容對大家有所幫助！