細胞培養(yǎng)：胎牛血清

  胎牛血清(FBS)是研究和工業(yè)實驗室體外細胞培養(yǎng)工作流程中不可或缺的細胞培養(yǎng)基補充劑。含有血清的培養(yǎng)基為重現生理條件的組織來源細胞的生長創(chuàng)造了一個人工環(huán)境。細胞培養(yǎng)基提供細胞生長和功能所必需的能量和營養(yǎng)來源。血清為細胞提供細胞增殖、細胞維持、細胞粘附到細胞培養(yǎng)物支持和信號傳導過程支持所需的生長因子、氨基酸、糖和激素。添加血清有助于維持培養(yǎng)基的pH值并防止在操作細胞時遭受機械損傷。相關文章《什么是胎牛血清？從基本概念到實際應用的全面解析！》

  如何獲取FBS？

  FBS是從適合食用的懷孕母牛的胎兒血液中采集的。血液在無菌條件下采集，冷藏并凝固。離心后，血清與凝結的血細胞分離。血液采集僅在有執(zhí)照的設施中進行，并且包括健康狀況得到批準的動物。相應的主管部門會檢查FBS設施以控制質量標準。國際動物衛(wèi)生局(OIE)與各國政府合作，致力于控制傳染性動物疾病的傳播。

  一些公司在其產品的可追溯性（動物來源信息和動物健康記錄）方面仍存在問題。確保可追溯性非常重要，可以避免血清批次之間的不一致以及產品特性的變化。行業(yè)機構國際血清工業(yè)協(xié)會(ISIA)成立的目的是促進與動物源產品相關的實踐的可追溯性和合規(guī)性。加入ISIA的公司的設施都經過獨立審計，并遵守國際可追溯性標準，包括收集和審查與加工、運輸或商業(yè)活動有關的文件。

  不同類型的FBS

  血清可從不同年齡的動物身上提取。FBS取自胎兒，而新生牛血清(NBCS)則取自出生不到20天的新生牛犢。成年牛血清取自12個月以上的牛。血清類型會影響生化成分。血清的選擇取決于細胞應用和細胞類型。

  FBS和新生牛血清之間最顯著的區(qū)別之一是循環(huán)抗體的水平。NBCS的免疫球蛋白(IgG)水平高于FBS，因為母牛給小牛喂食的第一批飼料或初乳富含抗體。區(qū)分血清來源的另一種方法是檢測γ-谷氨酰轉移酶(GGT)水平。GGT是一種存在于血清和不同細胞類型表面的轉移酶，在肝臟中特別活躍(2)。該酶負責抗氧化劑谷胱甘肽的代謝。與IgG一樣，GGT也存在于初乳中，在血液中循環(huán)。這導致NBCS的血清GGT水平高于FBS ?？梢允褂毛F醫(yī)篩查來檢測IgG和GGT。

  FBS的不同制備方法

  由于FBS是一種復雜的生物分子混合物，因此某些應用可能需要額外的準備步驟。FBS含有補體蛋白。對于特定細胞類型，血清中存在的抗體可以與細胞結合，激活補體蛋白并導致細胞裂解。

  1、熱滅活FBS ——將血清加熱至56°C持續(xù)30分鐘——可滅活補體蛋白。

  2、FBS的另一種制備方法涉及IgG消耗。血清中的IgG可能會妨礙從雜交瘤培養(yǎng)物中純化單克隆抗體。可以利用IgG與ProteinA以高親和力結合的能力從血清中去除IgG。與ProteinA共價偶聯(lián)的Sepharose柱可用于處理FBS并降低或消耗IgG水平。

  3、另一種FBS治療方法是活性炭剝離。這種治療方法使用活性炭樹脂來降低類固醇激素（雌二醇、孕酮、皮質醇）的濃度，這些激素是親脂性的（在脂質和脂肪中具有良好的溶解性）。對于受體研究，活性炭/葡聚糖剝離的FBS被證明是有用的，因為它降低了類固醇激素的濃度。

  4、一種FBS物理滅活處理涉及伽馬射線照射。盡管根據監(jiān)管要求對FBS進行了污染物檢測，但仍可能存在極低水平的污染物，從而對細胞培養(yǎng)造成問題。使用伽馬射線照射（波長較短的電磁輻射）處理FBS可減少病毒和支原體的病原體污染。該處理不會影響血清的質量，也不會影響激素、滲透壓、pH值和電泳圖。使用伽馬射線照射的FBS對于生產病毒和疫苗尤為重要。

  5、過濾也可用于處理FBS。使用0.45μm過濾器過濾血清可用于去除因纖維蛋白原存在而產生的絮狀物質，因為絮狀物質可能會妨礙實驗。對于培養(yǎng)對內毒素（脂多糖，LPS）敏感的細胞，例如巨噬細胞和免疫細胞，可能需要低內毒素FBS。在FBS中發(fā)現微量內毒素（LPS）。然而，超低內毒素FBS在無菌條件下經過額外過濾，以保證<0.1EU/ml的內毒素水平。此外，超濾可以去除細胞外囊泡（EV）中的污染物以及蛋白質和RNA聚集體，這些都是已知的FBS污染形式。EV污染可能會帶來問題。EV耗盡的FBS有利于需要標準化的臨床工作流程或EV研究。

  其他來源的血清

  除牛以外的其他動物的血清也已被證明可用于研究。例如，馬血清對于維持培養(yǎng)的造血祖細胞并使其保持分化程度較低的狀態(tài)非常重要。其他動物的血清也有用，包括山羊、驢、兔子、羔羊和豬。