ELISA 樣品制備和采集指南

  為了更好的實驗準確性，上海通蔚根據多年經驗為大家列出的 ELISA 樣品采集和儲存條件僅供一般指導。具體方案可能因細胞系或組織類型而異。如果長時間儲存樣品，建議測試樣品穩(wěn)定性。避免所有樣品類型重復凍融循環(huán)。

  血清- 使用血清分離管 (SST)，讓樣品在室溫下凝結 30 分鐘，然后以 1000 x g 離心 15 分鐘。立即取出血清并進行測定，或等分并將樣品儲存在 ≤ -20 °C 下。

  血漿- 使用 EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿。收集后 30 分鐘內以 1000 xg 離心 15 分鐘。立即測定或等分并將樣品儲存在 ≤ -20 °C 下。

  貧血小板血漿- 使用 EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿。收集后 30 分鐘內以 1000 xg 離心 15 分鐘。建議在 2-8 °C 下以 10,000 xg 對血漿進行額外的離心步驟 10 分鐘，以完全去除血小板。立即測定或等分并將樣品儲存在 ≤ -20 °C 下。

  細胞培養(yǎng)上清液- 通過以 500 xg 離心 5 分鐘去除顆粒。立即除去上清液并進行測定，或等分并將樣品儲存在 ≤ -20 °C 下。

  組織勻漿-組織勻漿的制備將根據組織類型而變化。用 1X PBS 沖洗組織以去除多余的血液，在 20 mL 的 1X PBS 中均質化，并在 ≤ -20 °C 下保存過夜。進行兩次凍融循環(huán)以破壞細胞膜后，將勻漿以 5000 x g 離心 5 分鐘。立即取出上清液并進行分析。或者，將樣品等分并儲存在 ≤ -20 °C 下。

  細胞裂解物- 將細胞溶解在裂解緩沖液中并置于冰上 30 分鐘。以 14,000 xg 離心管 5 分鐘以除去不溶物質。將上清液等分到新管中并丟棄剩余的全細胞提取物。使用總蛋白測定定量總蛋白濃度。立即測定或等分并儲存在 ≤ -20 °C 下。

  組織裂解物– 用 PBS 沖洗組織，切成 1-2 mm 的塊，并用組織勻漿器在 PBS 中勻漿。添加等體積的含有蛋白酶抑制劑的 RIPA 緩沖液，并在室溫下輕輕攪拌裂解組織 30 分鐘。離心去除碎片。使用總蛋白測定定量總蛋白濃度。立即測定或等分并儲存在 ≤ -20 °C 下。

  唾液- 將唾液收集到管中并以 10,000 x g 離心 5 分鐘。收集水層，立即進行測定或等分并將樣品儲存在 ≤ -20 °C 下。

  尿液- 無菌收集當天的第一次尿液（中流），直接排入無菌容器中。離心去除顆粒物質。立即測定或等分并儲存在 ≤ -20 °C 下。

  母乳- 在 2-8 °C 下以 1000 xg 離心 15 分鐘。收集水性部分并重復此過程總共 3 次。立即測定或等分并儲存在 ≤ -20 °C 下。R&D Systems 為您的研究提供廣泛的 ELISA 產品組合。

  上述為大家總結ELISA樣品制備和采集指南，這些是制備用于 ELISA 試驗的常用待測樣品的一般指導原則。與試驗開發(fā)的所有方面一樣，最佳樣品制備程序因實驗目標的不同而有所不同。開發(fā)新的實驗時，最好查閱文獻，以獲得與您自己的樣品類似的實驗示例。