ELISA 樣品制備和采集指南

  為了更好的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，上海通蔚根據(jù)多年經(jīng)驗(yàn)為大家列出的 ELISA 樣品采集和儲(chǔ)存條件僅供一般指導(dǎo)。具體方案可能因細(xì)胞系或組織類(lèi)型而異。如果長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存樣品，建議測(cè)試樣品穩(wěn)定性。避免所有樣品類(lèi)型重復(fù)凍融循環(huán)。

  血清- 使用血清分離管 (SST)，讓樣品在室溫下凝結(jié) 30 分鐘，然后以 1000 x g 離心 15 分鐘。立即取出血清并進(jìn)行測(cè)定，或等分并將樣品儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  血漿- 使用 EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿。收集后 30 分鐘內(nèi)以 1000 xg 離心 15 分鐘。立即測(cè)定或等分并將樣品儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  貧血小板血漿- 使用 EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿。收集后 30 分鐘內(nèi)以 1000 xg 離心 15 分鐘。建議在 2-8 °C 下以 10,000 xg 對(duì)血漿進(jìn)行額外的離心步驟 10 分鐘，以完全去除血小板。立即測(cè)定或等分并將樣品儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  細(xì)胞培養(yǎng)上清液- 通過(guò)以 500 xg 離心 5 分鐘去除顆粒。立即除去上清液并進(jìn)行測(cè)定，或等分并將樣品儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  組織勻漿-組織勻漿的制備將根據(jù)組織類(lèi)型而變化。用 1X PBS 沖洗組織以去除多余的血液，在 20 mL 的 1X PBS 中均質(zhì)化，并在 ≤ -20 °C 下保存過(guò)夜。進(jìn)行兩次凍融循環(huán)以破壞細(xì)胞膜后，將勻漿以 5000 x g 離心 5 分鐘。立即取出上清液并進(jìn)行分析?；蛘?，將樣品等分并儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  細(xì)胞裂解物- 將細(xì)胞溶解在裂解緩沖液中并置于冰上 30 分鐘。以 14,000 xg 離心管 5 分鐘以除去不溶物質(zhì)。將上清液等分到新管中并丟棄剩余的全細(xì)胞提取物。使用總蛋白測(cè)定定量總蛋白濃度。立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  組織裂解物– 用 PBS 沖洗組織，切成 1-2 mm 的塊，并用組織勻漿器在 PBS 中勻漿。添加等體積的含有蛋白酶抑制劑的 RIPA 緩沖液，并在室溫下輕輕攪拌裂解組織 30 分鐘。離心去除碎片。使用總蛋白測(cè)定定量總蛋白濃度。立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  唾液- 將唾液收集到管中并以 10,000 x g 離心 5 分鐘。收集水層，立即進(jìn)行測(cè)定或等分并將樣品儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  尿液- 無(wú)菌收集當(dāng)天的第一次尿液（中流），直接排入無(wú)菌容器中。離心去除顆粒物質(zhì)。立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。

  母乳- 在 2-8 °C 下以 1000 xg 離心 15 分鐘。收集水性部分并重復(fù)此過(guò)程總共 3 次。立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C 下。R&D Systems 為您的研究提供廣泛的 ELISA 產(chǎn)品組合。

  上述為大家總結(jié)ELISA樣品制備和采集指南，這些是制備用于 ELISA 試驗(yàn)的常用待測(cè)樣品的一般指導(dǎo)原則。與試驗(yàn)開(kāi)發(fā)的所有方面一樣，最佳樣品制備程序因?qū)嶒?yàn)?zāi)繕?biāo)的不同而有所不同。開(kāi)發(fā)新的實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好查閱文獻(xiàn)，以獲得與您自己的樣品類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)示例。