ELISA是用來檢測什么的？ELISA檢測原理及實踐應用指南

  在生命科學領域的許多情況下，及時且經(jīng)濟高效地檢測和定量樣品中的抗原或抗體非常重要。從識別接種疫苗或感染個

體的免疫反應，檢測您希望在細胞表面表達的蛋白質(zhì)的表達，到執(zhí)行質(zhì)量控制測試。擁有能夠進行此類評估的工具是關(guān)鍵。

通蔚elisa試劑盒

  酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)就是這樣一種測試，已被證明作為研究和診斷工具具有無價的價值。作為科研人員，了解認識ELISA檢測方法，不僅有助于他們更好地進行實驗研究，更能為他們的科研成果提供有力支撐。

  ELISA檢測原理

  ELISA基于抗原抗體反應的概念，代表白細胞B細胞產(chǎn)生的抗體與抗原之間的化學相互作用。這種特定的免疫反應在保護身體免受病原體和毒素等入侵者的侵害方面發(fā)揮著重要作用。因此，通過利用這種反應，ELISA可以對抗原進行高度靈敏和選擇性的定量/定性分析，包括蛋白質(zhì)、肽、核酸、激素、除草劑和植物次生代謝物。為了檢測這些分子，使用酶標記抗原或抗體，即所謂的酶免疫測定，其中堿性磷酸酶（ALP）、辣根過氧化物酶（HRP）和β-半乳糖苷酶都常用。液相中的抗原被固定在固相上，例如由硬質(zhì)聚苯乙烯、聚氯乙烯和聚丙烯構(gòu)成的微量滴定板。隨后，使抗原與特異性抗體反應，并通過酶標記的二抗進行檢測。使用顯色底物產(chǎn)生的顏色對應于抗原的存在。例如，ALP水解磷酸對硝基苯酯產(chǎn)生對硝基苯酚，可在405 nm（黃色）處檢測到，而HRP催化顯色底物的轉(zhuǎn)化，例如2,2'-連氮基-雙（3-乙基苯并噻唑啉）-6-磺酸）二銨鹽、3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺、鄰苯二胺生成有色產(chǎn)品。通過使用化學發(fā)光底物（例如分別用于ALP和HRP的氯-5-取代金剛烷基-1,2-二氧雜環(huán)丁烷磷酸鹽和魯米諾）以及用于β-半乳糖苷酶的熒光底物（例如4-甲基傘形基半乳糖苷和硝基苯基半乳糖苷），可以實現(xiàn)更靈敏的檢測取得成就。這些酶-底物反應通常在30-60分鐘內(nèi)完成，對于各個反應，通過添加適當?shù)娜芤海ɡ鐨溲趸c、鹽酸、硫酸、碳酸鈉和疊氮化鈉）來停止反應。最后，使用微量滴定板讀數(shù)器檢測有色或熒光產(chǎn)物。

  ELISA檢測步驟

  ELISA有多種常用方法類型。但它們都利用在96孔聚苯乙烯板底部堆積的抗體和抗原。這些孔經(jīng)過化學處理，使其具有“粘性”，從而增加了蛋白質(zhì)吸附到板表面的能力。

  ELISA測定依賴于酶結(jié)合標記和底物之間的酶促反應來產(chǎn)生比色、化學發(fā)光或熒光產(chǎn)物。然后通過分光光度計或熒光計檢測和定量這些產(chǎn)物，提供有關(guān)樣品中目標蛋白濃度的信息。

  ELISA由多個步驟組成。其中許多步驟是封閉和洗滌步驟，以防止非特異性結(jié)合。當?shù)鞍踪|(zhì)通過脫靶相互作用相互吸附或吸附到ELISA板的塑料表面時，就會發(fā)生非特異性結(jié)合。不同方法之間的確切ELISA步驟略有不同，但這里我們將重點關(guān)注夾心ELISA作為示例。

  夾心ELISA步驟

  第1步：捕獲蛋白的固定化

  在夾心ELISA中，捕獲蛋白是抗體，目標是抗原。因此，ELISA的第一個步驟是將捕獲抗體固定到板上。許多ELISA試劑盒都帶有預先固定的捕獲蛋白。

  第2步：洗掉孔表面任何未吸附的捕獲蛋白

  使用去污劑的洗滌步驟可減少蛋白質(zhì)之間的脫靶疏水相互作用，并從板上去除未結(jié)合的捕獲蛋白質(zhì)。

  第3步：封閉板上任何未結(jié)合的位點

  蛋白質(zhì)之間的疏水相互作用是由電荷或疏水性介導的。這意味著可以通過封閉和清洗步驟在一定程度上減輕它們。

  將蛋白質(zhì)添加到板中，蛋白質(zhì)吸附到板表面的開放位點。牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白或抑肽酶等蛋白質(zhì)通常用于ELISA測定中的封閉。

  這些蛋白質(zhì)將吸附到板上，從而防止目標蛋白質(zhì)隨后訪問這些位點。以這種方式降低非特異性結(jié)合的發(fā)生率會導致背景噪音降低。

  第4步：洗掉孔中所有未吸附的封閉蛋白

  第二個洗滌步驟去除任何未結(jié)合的封閉蛋白。

  第5步：與樣品（血清、尿液、唾液或加標研究溶液）一起孵育

  在這一步中，抗體和抗原之間發(fā)生特異性識別。在夾心ELISA中，抗體被吸附到板上，并與樣品液中的目標抗原結(jié)合。這需要一個孵育步驟以使結(jié)合動力學達到平衡。

  第6步：洗掉孵化液

  這是至關(guān)重要的洗滌步驟，通常需要多次洗滌以確保洗掉任何未結(jié)合的抗原。在此步驟之后，孔中唯一應保留的抗原是那些附著于捕獲抗體的抗原。

  第7步：與檢測抗體一起孵育

  ELISA中的檢測抗體與某種標記物結(jié)合，例如熒光團（用于熒光測定）或酶（用于比色檢測或化學發(fā)光）。檢測抗體“識別”目標抗原上與捕獲抗體不同的表位。因此，三明治ELISA測定產(chǎn)生捕獲抗體-抗原-檢測抗體的“三明治”。

  第8步：洗掉未結(jié)合的檢測抗體

  步驟9：應用底物進行化學比色或化學發(fā)光反應，或應用入射光進行熒光反應，并對信號進行定量

  根據(jù)所使用的ELISA方法，熒光量、發(fā)光量或顏色強度表明從樣品中捕獲了多少目標抗原。

  ELISA與其他檢測方法的區(qū)別

在生命科學領域，科研人員經(jīng)常需要運用各種檢測方法對生物樣本進行定性和定量分析。酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）作為其中的一種常用技術(shù)，與其他檢測方法相比，既存在相似之處，也有其獨特之處。為了更直觀的表達，下面就以表格對比：

	ELISA	其他免疫學檢測方法（如免疫熒光、免疫組化）	PCR（聚合酶鏈式反應）	免疫印跡
原理	抗原-抗體特異性結(jié)合，酶促反應放大信號	抗原-抗體特異性結(jié)合	DNA復制擴增特定序列	蛋白質(zhì)與抗體的特異性結(jié)合
操作流程	簡便、快速，高通量	相對簡便，但可能涉及熒光標記等步驟	復雜，需要精密的儀器和嚴格的實驗條件	相對復雜，涉及電泳、轉(zhuǎn)膜等步驟
檢測范圍	抗原、抗體檢測，廣泛適用于多個領域	抗原、抗體檢測，多用于組織或細胞定位	DNA、RNA特定序列檢測	蛋白質(zhì)表達分析
靈敏度和特異性	高靈敏度和特異性	高靈敏度和特異性	極高靈敏度和特異性	高靈敏度和特異性
樣本要求	對樣本純度要求較高	對樣本純度有一定要求	對DNA/RNA質(zhì)量要求較高	對蛋白質(zhì)樣本質(zhì)量有一定要求
結(jié)果解讀	需要謹慎，避免干擾因素影響	需要根據(jù)熒光信號等判斷	需要通過凝膠電泳和序列分析	通過條帶位置和強度分析蛋白質(zhì)表達
適用場景	疾病診斷、藥物研發(fā)、環(huán)境監(jiān)測等	組織學、病理學等研究	基因檢測、疾病診斷、分子生物學研究	蛋白質(zhì)表達分析、信號通路研究

  請注意，這個表格只是對ELISA和其他幾種常見檢測方法的一個簡要對比，實際上每種檢測方法都有其獨特的特點和適用場景。科研人員在實際應用中，需要根據(jù)具體的研究需求和實驗條件來選擇最合適的檢測方法。

  ELISA檢測應用

  ELISA可用來定量一份檢測樣品中的一種或多種抗原。鑒于抗體試劑的特異性以及檢測的簡易性，ELISA通常被視為生物樣品定量檢測的金標準。在生物醫(yī)學/生物化學領域，使用抗體-抗原結(jié)合連同信號放大的ELISA原理的檢測非常普遍。在研究實驗室，這些檢測可用來定量蛋白水平或通路激活。在臨床上，ELISA有各種用途，包括測定患者血清樣品中藥物治療的生物標記物或細胞因子水平。ELISA還適用于植物生物學，并且可用于檢測農(nóng)作物過敏原。

  將ELISA用作一種研究工具

  在多種研究領域都會用到ELISA平臺。它能特異并靈敏地檢測抗體，因此是一種方便的生物發(fā)現(xiàn)工具。它在所有生物研究領域中被廣泛用來檢測和定量目的抗原。這類抗原會被分泌成細胞培養(yǎng)基、某種細胞中的總蛋白，或細胞信號轉(zhuǎn)導期間發(fā)生的翻譯后修飾(PTM)。

  將ELISA用作一種診斷工具

  除了用于研究之外，ELISA還廣泛用于診斷檢測，包括對病毒感染、食物過敏原、毒性和癌癥的診斷檢測。用抗體檢測感染性病毒是一種快速的臨床檢測，這種檢測在擴展后可同時檢測多份樣品。這些檢測通常在血清或血樣上完成，但也可以使用細胞或組織的裂解物進行。

  ELISA檢測的發(fā)展趨勢

  隨著生命科學技術(shù)的不斷進步和科研需求的日益增長，酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）作為一種經(jīng)典且廣泛應用的檢測技術(shù)，其發(fā)展趨勢也備受關(guān)注。未來，ELISA檢測將在以下幾個方面展現(xiàn)出明顯的發(fā)展趨勢：

  一、自動化和智能化將成為ELISA檢測的重要發(fā)展方向。傳統(tǒng)的ELISA實驗操作過程雖然相對簡便，但仍存在繁瑣的樣本處理、試劑添加和結(jié)果判讀等步驟。隨著自動化儀器和人工智能技術(shù)的不斷發(fā)展，未來的ELISA檢測將實現(xiàn)更高程度的自動化和智能化，從樣本處理到結(jié)果分析，整個過程將更加快速、準確和便捷。

  二、高靈敏度和高特異性將是ELISA檢測追求的另一個重要目標。隨著科研人員對疾病發(fā)病機制、藥物作用機制等問題的深入研究，對檢測技術(shù)的靈敏度和特異性要求也越來越高。未來，通過優(yōu)化抗體選擇、改進實驗條件、引入新的信號放大技術(shù)等手段，ELISA檢測的靈敏度和特異性將得到進一步提升，為科研人員提供更加準確、可靠的數(shù)據(jù)支持。

  三、多重檢測和微型化也是ELISA檢測未來的發(fā)展趨勢之一。多重檢測能夠同時檢測多種抗原或抗體，提高檢測效率和通量；而微型化則能夠減少樣本和試劑的用量，降低成本，同時便于現(xiàn)場快速檢測。這些技術(shù)的發(fā)展將使ELISA檢測更加適應復雜多樣的科研需求。

  四、隨著生命科學的快速發(fā)展，交叉學科的研究也越來越受到重視。未來，ELISA檢測將與其他技術(shù)如基因測序、蛋白質(zhì)組學等相結(jié)合，形成多技術(shù)融合的檢測平臺，為科研人員提供更加全面、深入的分析手段。

  ELISA是用來檢測什么？通過上述介紹，相信您對elisa檢測有所了解。ELISA在科研領域重要性是不言而有的，ELISA在不斷的推動生命科學的發(fā)展，作為科研人員，我們與時俱進，不斷的深入學習和掌握ELISA檢測技術(shù)，推動科研進步！