發(fā)布時(shí)間:2024-08-14 發(fā)布作者:上海通蔚生物
免疫測(cè)定法根據(jù)檢測(cè)方法分類分為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)、放射免疫分析、熒光免疫分析、熒光免疫分析和蛋白質(zhì)印跡法等。本篇文章上海通蔚生物給大家具體的說一下它們之間的區(qū)別。
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)
放射免疫分析
基本原理
使用與抗體相關(guān)的酶。
檢測(cè)基于酶-底物反應(yīng)的顏色變化或光發(fā)射。
使用放射性同位素標(biāo)記抗原。
檢測(cè)是基于測(cè)量抗原抗體復(fù)合物發(fā)射的放射性。
檢測(cè)機(jī)制安全
產(chǎn)生可測(cè)量的顏色變化或光發(fā)射。
測(cè)量放射性同位素發(fā)射的放射性。
安全
安全、無輻射危害。
無需特殊處理或處置要求。
涉及輻射危害。
需要小心處理、儲(chǔ)存和處置放射性物質(zhì)。
潛在的輻射危害需要記錄并報(bào)告。
實(shí)驗(yàn)室要求
可以在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
不需要專門的設(shè)施或培訓(xùn)。
需要專門的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施來處理放射性物質(zhì)。
需要專門的區(qū)域和對(duì)人員進(jìn)行專門的培訓(xùn)。
成本和便利性
一般成本較低。
沒有針對(duì)材料儲(chǔ)存或處理的具體安排。
由于使用放射性同位素而導(dǎo)致成本較高。
需要對(duì)放射性物質(zhì)的處理、儲(chǔ)存和處置進(jìn)行細(xì)致的規(guī)劃。
敏感度
靈敏度高,但一般比RIA靈敏度低。
比 ELISA 更靈敏。
監(jiān)管和安全問題
除了標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室安全之外,沒有特定的監(jiān)管問題。
由于使用放射性物質(zhì)而產(chǎn)生嚴(yán)格的監(jiān)管和安全問題。
同位素的半衰期較短,限制了它的應(yīng)用。
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)
熒光免疫分析
基本原理
使用酶聯(lián)抗體。
檢測(cè)基于酶-底物反應(yīng)的顏色變化或光發(fā)射。
使用附著于抗體的熒光標(biāo)簽。
檢測(cè)基于對(duì)抗原抗體復(fù)合物發(fā)出的熒光強(qiáng)度的測(cè)量。
檢測(cè)機(jī)制
測(cè)量顏色變化或光發(fā)射。
測(cè)量熒光強(qiáng)度。
敏感度
靈敏度高,但對(duì)于極低濃度,靈敏度一般低于熒光免疫分析法。
靈敏度高,適合檢測(cè)低濃度的抗原。
應(yīng)用
廣泛應(yīng)用于臨床診斷和研究。
適用于檢測(cè)和量化各種生物液體和組織中的抗原。
適用于需要高靈敏度的應(yīng)用。
常用于測(cè)量低抗原濃度的研究。
易于使用
使用微孔板讀數(shù)儀等標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備進(jìn)行設(shè)置更加簡(jiǎn)單。
需要能夠檢測(cè)熒光的設(shè)備。
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酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) |
化學(xué)發(fā)光免疫分析 |
基本原理 |
使用酶聯(lián)抗體。 檢測(cè)基于酶-底物反應(yīng)的顏色變化或光發(fā)射。 |
使用從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)發(fā)光的分子。 堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶等酶催化與底物(例如魯米諾)的反應(yīng),產(chǎn)生光。 |
檢測(cè)機(jī)制 |
測(cè)量顏色變化或光發(fā)射。 |
測(cè)量光發(fā)射。 |
敏感性和特異性 |
敏感性和特異性較高,但一般低于CLIA。 |
與 ELISA 相比,靈敏度和特異性更高。 在檢測(cè) SARS-CoV-2 等疾病的抗體時(shí)顯示出更高的靈敏度(92.3% 到 97.8% 對(duì)比 ELISA 的 75.0% 到 84.3%)。 |
應(yīng)用 |
用于檢測(cè)和定量各種疾病的抗原和抗體,如 SARS-CoV-2、HIV、HCV、HBV、肺炎支原體、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋體等。 |
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易于使用 |
提供快速的結(jié)果。 需要專門的設(shè)備來測(cè)量光發(fā)射。 |
使用微孔板讀數(shù)儀等標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備進(jìn)行設(shè)置更加簡(jiǎn)單。 與 CLIA 相比更耗時(shí)。 |
成本效益 |
更具成本效益,適合日常使用。 |
由于需要專門的設(shè)備和試劑,因此通常價(jià)格更昂貴。 |
檢測(cè)范圍 |
測(cè)量光密度,其范圍可能更加有限。 |
測(cè)量相對(duì)光單位,提供更廣泛的檢測(cè)范圍。 |
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酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) |
蛋白質(zhì)印跡法 |
基本原理 |
使用光密度測(cè)量抗原抗體反應(yīng)。 由于其簡(jiǎn)單性、速度和適合高通量實(shí)驗(yàn)室而受到青睞。 使用96孔板,所需樣品量較少。 使用標(biāo)準(zhǔn)曲線量化抗原濃度。 |
更加復(fù)雜,更加耗時(shí)。
需要仔細(xì)加載樣品,考慮膜和信號(hào)飽和度,并使用內(nèi)部控制進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。
具有高特異性并能檢測(cè)蛋白質(zhì)的大小和純度。
能夠利用熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行多重檢測(cè)。 |
易于使用 |
操作簡(jiǎn)單,適合大規(guī)模測(cè)試。 |
復(fù)雜且需要更多時(shí)間和專業(yè)知識(shí)。 涉及電泳、轉(zhuǎn)移到膜和抗體檢測(cè)等多個(gè)步驟。 |
敏感性和特異性 |
對(duì)檢測(cè)和定量抗原具有高靈敏度和良好的特異性。 |
特異性高,能夠確認(rèn)特定蛋白質(zhì)的存在和純度。 可以檢測(cè)蛋白質(zhì)的大小,提供有關(guān)目標(biāo)的額外信息。
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應(yīng)用 |
廣泛應(yīng)用于臨床診斷和研究。 非常適合高通量篩選和常規(guī)檢測(cè)。
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在需要詳細(xì)蛋白質(zhì)分析的研究和臨床環(huán)境中非常有價(jià)值。 用于確認(rèn)特定目標(biāo)并分析蛋白質(zhì)的大小和純度。
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檢測(cè)和量化 |
依賴于光密度測(cè)量。 使用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行精確的濃度測(cè)定。
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可以實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)帶的可視化,提供有關(guān)蛋白質(zhì)大小的信息。 可以使用內(nèi)部控制進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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綜合上述,相信你對(duì)免疫測(cè)定法檢測(cè)方法之間區(qū)別有所了解認(rèn)識(shí),ELISA作為免疫測(cè)定法的經(jīng)典代表,因其操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、成本較低等優(yōu)點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。然而,隨著科技的進(jìn)步,其他免疫測(cè)定法不斷涌現(xiàn),各有優(yōu)劣。無論是ELISA還是其他免疫測(cè)定方法,選擇合適的檢測(cè)方法需要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹颖绢愋?、目?biāo)物質(zhì)等因素綜合考慮。未來,隨著技術(shù)的發(fā)展,免疫測(cè)定法將會(huì)更加精準(zhǔn)、高效、便捷,為科學(xué)研究和疾病診斷提供更加強(qiáng)大的助力。