揭示ELISA實驗原理與類型，讓檢測更精準(zhǔn)

  ELISA是生物實驗不可缺的一部分，在實驗過程中對ELISA原理及類型的了解有助于更好的實現(xiàn)實驗效果。今天由上海通蔚給大家介紹一下ELISA原理和類型。
  
  內(nèi)容：
  
  什么是ELISA？
  
  ELISA基本原理？
  
  ELISA優(yōu)點和缺點？
  
  ELISA的類型？
  

  什么是ELISA？

  

  ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）是一種檢測生物樣品中抗原是否存在的技術(shù)。與其他類型的免疫測定一樣，ELISA 依賴于抗體，利用高度特異性的抗體-抗原相互作用來檢測目標(biāo)抗原。

上海通蔚elisa試劑盒

  

  ELISA 基本原理

  

  在 ELISA 測定中，抗原被固定到固體表面。這可以直接完成，也可以通過使用固定在表面上的捕獲抗體本身來完成。然后將抗原與檢測抗體復(fù)合，該檢測抗體與適合檢測的分子（例如酶或熒光團）綴合。

  
  圖 2. ELISA 測定的基本設(shè)置。多孔板上的捕獲抗體將固定的抗原。該抗原將被與生物素和鏈霉親和素-HRP 綴合的檢測抗體識別并結(jié)合。
  
  ELISA 測定通常在多孔板（96 或 384 孔）中進行，多孔板提供固定抗原的固體表面。分析物的固定有助于將抗原與樣品中的其余成分分離。這一特性使得 ELISA 成為同時對多個樣品進行的最簡單的檢測方法之一。
  

  ELISA優(yōu)點和缺點？

  
  ELISA 的優(yōu)點和缺點
  
  優(yōu)點
  
  ? 高靈敏度和特異性：由于使用了抗體，ELISA 通常能夠以非常特異的方式檢測皮克水平的抗原。
  
  ? 高通量：商業(yè) ELISA 試劑盒通常以 96 孔板形式提供。但該測定可以輕松適應(yīng) 384 孔板。
  
  ? 易于執(zhí)行：協(xié)議易于遵循，幾乎不需要動手操作時間。
  
  ? 定量：可以測定樣品中抗原的濃度。
  
  ? 可以測試各種樣本類型：血清、血漿、細胞和組織提取物、尿液和唾液等。
  
  缺點
  
  ? 臨時讀數(shù)：檢測基于酶/底物反應(yīng)，因此必須在短時間內(nèi)獲得讀數(shù)。
  
  ? 有限的抗原信息：信息僅限于樣品中抗原的數(shù)量或存在。
  

  ELISA 的類型

  
  ELISA 主要有四種類型：直接 ELISA、間接 ELISA、夾心 ELISA 和競爭 ELISA。每個都有獨特的優(yōu)點、缺點和適用性。
  

  直接ELISA

  
  在直接 ELISA 中，抗原被固定到多孔板的表面，并用對該抗原具有特異性的抗體進行檢測。該抗體直接與 HRP 或其他檢測分子綴合。
  

  間接ELISA

  
  間接 ELISA是一種采用兩步過程進行檢測的技術(shù)，其中對抗原具有特異性的一抗與靶標(biāo)結(jié)合，而針對一抗宿主物種的標(biāo)記二抗與一抗結(jié)合進行檢測。對于直接 ELISA 測定，抗原固定在多孔板的表面。
  
  該方法還可用于通過用血清代替一抗來檢測血清樣品中的特異性抗體。
  
  夾心ELISA
  
  夾心 ELISA（或夾心免疫測定）是最常用的形式。這種形式需要兩種針對抗原不同表位的特異性抗體。這兩種抗體通常稱為匹配抗體對。其中一種抗體包被在多孔板的表面并用作捕獲抗體以促進抗原的固定。另一種抗體被綴合并促進抗原的檢測。
  

  競爭性ELISA

  
  競爭性 ELISA 測定也稱為抑制 ELISA 或競爭性免疫測定，通過檢測信號干擾來測量抗原濃度。之前的每種賽制都可以適應(yīng)競爭賽制。
  
  樣品抗原與參考抗原競爭結(jié)合特定量的標(biāo)記抗體。將參考抗原預(yù)涂在多孔板上，將樣品與標(biāo)記抗體預(yù)孵育并添加到孔中。根據(jù)樣品中抗原的量，或多或少的游離抗體將可用于結(jié)合參考抗原。這意味著樣品中的抗原越多，檢測到的參考抗原越少，信號越弱。
  

  一些競爭性 ELISA 試劑盒使用標(biāo)記抗原而不是標(biāo)記抗體。標(biāo)記抗原和樣品抗原（未標(biāo)記）競爭與一抗的結(jié)合。樣品中抗原的量越低，由于孔中標(biāo)記的抗原越多，信號越強。

  我應(yīng)該使用哪種類型的 ELISA？

	優(yōu)點	缺點
直接elisa	方案短：節(jié)省時間和試劑。 與二抗無交叉反應(yīng)。	潛在的高背景：樣品中的所有蛋白質(zhì)都與表面結(jié)合。 無信號放大。 靈活性低：一抗必須偶聯(lián)。
間接elisa	信號放大：多個二抗將與一抗結(jié)合。 高靈活性：同一個二抗可用于多種一抗。	與直接 ELISA 相比，實驗方案較長。 二抗的潛在交叉反應(yīng)性。
夾心elisa	高特異性：涉及兩種抗體檢測同一抗原上的不同表位。 適用于復(fù)雜樣品。 靈活性和靈敏度高：直接法和間接法均可使用。	要求嚴(yán)格的設(shè)計：找到針對同一目標(biāo)的兩種抗體， 它們能夠識別不同的表位并且能夠很好地協(xié)同工作，有時可能具有挑戰(zhàn)性。
競爭elisa	取決于所選的基礎(chǔ) ELISA。 適用于小抗原。	取決于所選的基礎(chǔ) ELISA