【通蔚生物】：ELISA試劑盒實驗操作要點和處理方法

優(yōu)質(zhì)的ELISA試劑盒是保證檢驗質(zhì)量的基礎(chǔ)。從4℃冰箱取出的試劑必須放置室溫20～30 min 后再啟用，否則水化層的形成可能影響試劑的原始濃度及試劑中溶質(zhì)分子的均勻分布。未用完的試劑和質(zhì)控品應(yīng)密封并及時放回冰箱保存。根據(jù)蛋白質(zhì)在冷凍過程中出現(xiàn)蛋白分子分布改變的特點，試劑正式啟用前應(yīng)充分混勻。所用蒸餾水、去離子水和自行配制的緩沖液等，都必須調(diào)整其pH值和離子強度等。不同批次的試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量一致，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件，嚴格執(zhí)行這一標準可以避免試劑批號改變而重建質(zhì)控體系及重新評估試劑的復雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性。

患者標本中有可能含有干擾試驗的免疫物質(zhì)，導致假陽性或假陰性的結(jié)果，干擾因素一般可分為兩類，即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素一般包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體及某些自身抗體等，避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合適的試劑；外源性干擾因素包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長及標本凝固等。要注意避免標本出現(xiàn)嚴重溶血，標本中血紅蛋白中含有血紅素基因，其具有類過氧化物的活性，因此，在以辣根過氧化物酶(HRP)為標記的ELISA試劑盒測定試驗中，容易在溫育過程中吸附于固相，從而與加入的底物反應(yīng)顯色。

標本在低溫下保存時間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA試劑盒測定中會導致本底加深，甚至出現(xiàn)假陽性結(jié)果。通常血清標本可在2～8℃保存1 周，冷凍保存時間會更長。血清標本應(yīng)充分離心，否則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。冷凍保存標本避免反復凍融，標本的反復凍融會因其所產(chǎn)生的機械剪切力對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，使抗體效價下降從而引起假陰性結(jié)果。標本的采集及分離要注意盡量避免細菌的污染。此外，標本在凍存時會因蛋白質(zhì)局部濃縮分布不均，因此重新溶解的標本必須混勻，但不要劇烈振蕩和反復顛倒。