【通蔚生物】：ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)和處理方法

優(yōu)質(zhì)的ELISA試劑盒是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的基礎(chǔ)。從4℃冰箱取出的試劑必須放置室溫20～30 min 后再啟用，否則水化層的形成可能影響試劑的原始濃度及試劑中溶質(zhì)分子的均勻分布。未用完的試劑和質(zhì)控品應(yīng)密封并及時(shí)放回冰箱保存。根據(jù)蛋白質(zhì)在冷凍過(guò)程中出現(xiàn)蛋白分子分布改變的特點(diǎn)，試劑正式啟用前應(yīng)充分混勻。所用蒸餾水、去離子水和自行配制的緩沖液等，都必須調(diào)整其pH值和離子強(qiáng)度等。不同批次的試劑在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量一致，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件，嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免試劑批號(hào)改變而重建質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性。

患者標(biāo)本中有可能含有干擾試驗(yàn)的免疫物質(zhì)，導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果，干擾因素一般可分為兩類(lèi)，即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素一般包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體及某些自身抗體等，避免內(nèi)源性干擾因素主要通過(guò)選擇合適的試劑；外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)及標(biāo)本凝固等。要注意避免標(biāo)本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血，標(biāo)本中血紅蛋白中含有血紅素基因，其具有類(lèi)過(guò)氧化物的活性，因此，在以辣根過(guò)氧化物酶(HRP)為標(biāo)記的ELISA試劑盒測(cè)定試驗(yàn)中，容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與加入的底物反應(yīng)顯色。

標(biāo)本在低溫下保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA試劑盒測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底加深，甚至出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。通常血清標(biāo)本可在2～8℃保存1 周，冷凍保存時(shí)間會(huì)更長(zhǎng)。血清標(biāo)本應(yīng)充分離心，否則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽(yáng)性結(jié)果。冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融，標(biāo)本的反復(fù)凍融會(huì)因其所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，使抗體效價(jià)下降從而引起假陰性結(jié)果。標(biāo)本的采集及分離要注意盡量避免細(xì)菌的污染。此外，標(biāo)本在凍存時(shí)會(huì)因蛋白質(zhì)局部濃縮分布不均，因此重新溶解的標(biāo)本必須混勻，但不要?jiǎng)×艺袷幒头磸?fù)顛倒。