ELISA試劑盒實驗前的準(zhǔn)備事項

  Elisa試劑盒正確的實驗步驟是實驗結(jié)果準(zhǔn)確必備條件，了解elisa試劑盒實驗注意事項有助于實驗成功進(jìn)行。接下來上海通蔚帶大家來了解elisa試劑盒實驗步驟及注意事項。

  Elisa試劑盒實驗步驟

  
  第一步叫做包被，把抗原和共享載體結(jié)合起來。
  
  第二步叫洗滌，洗滌相對elisa實驗來說是相對比較重要的第一步，每一次操作中間都要洗滌。洗滌液一般是緩沖液，里面加上土溫，土溫是去污劑，可以把沒有結(jié)合的物質(zhì)洗掉。
  
  第三步是封閉，封閉就是固相材體就相當(dāng)于一個非常大的空間，抗原只有結(jié)合其中非常少的一部分，其他地方還有很多待結(jié)合的位點，需要用到雜蛋白把這些位點全部覆蓋起來，才能讓一抗和二抗與空白位點結(jié)合。
  
  封閉之后，還要把多余的蛋白洗滌之后，就可以進(jìn)行加樣，把待檢抗體加進(jìn)體系中，讓待檢抗體和包被在固相載體上的抗原進(jìn)行特異性結(jié)合。把多余的待檢抗體洗滌之后，就會得到抗原和抗體結(jié)合的復(fù)合物。
  
  之后加入酶標(biāo)二抗，這部分抗體屬于一抗的FC端結(jié)合的抗體，同時還帶著酶標(biāo)記，所以它只是起到2種作用。一種作用是把酶和待檢物質(zhì)中抗體含量結(jié)合起來一種作用，類似一種橋梁。
  
  把多余的二抗洗滌之后，就會形成一種二抗、一抗和待檢測抗原包含酶的復(fù)合物。
  
  第四步加入顯色液，可以讓它產(chǎn)生顏色反應(yīng)。終止之后一般加入氫氧根或者酸根離子，就是鹽酸或者氫氧化鈉去終止整個反應(yīng)，上述就是整個ELISA過程。
  
  完成ELISA試劑盒實驗步驟之后，最后一步拿到酶標(biāo)語上進(jìn)行讀數(shù)，得到最終把它量化的儀器叫做酶標(biāo)語，就是專門去作為讀數(shù)用的。一般來說現(xiàn)在用鹽酸中指的波長應(yīng)該是450納米，去對它進(jìn)行讀數(shù)，最后對結(jié)果有一個量化的體現(xiàn)。
  

  elisa試劑盒注意事項

       在ELISA試劑盒實驗過程還有一些注意事項：
  
  第一點就是包被液選擇。包被液就是把抗原包被在固相載體上的稀釋液S包。一般分為2種，一種是PBS，一種是CPS，其中這兩個比較常用的是PSB.
  
  第二點就是包被溫度的選擇。一般來說包被溫度都是4度條件下過夜或者37度保溫2小時。一般建議4度條件下包被，因為蛋白容易在37度降解。
  
  第三點就是包被濃度選擇。包被濃度根據(jù)實驗效果、實驗條件還有包被物的性質(zhì)去改變的。一般來說蛋白質(zhì)包被的濃度推薦是1-5ug/ml。
  
  第四點就是封閉液的選擇。一般使用1-5%的脫脂牛奶或者血清蛋白。大家可以根據(jù)抗原的條件來進(jìn)行選擇，其實大多數(shù)情況下脫脂牛奶就夠了。
  
  上述為大家解釋了ELISA試劑盒實驗步驟及注意事項，大家根據(jù)自己實驗?zāi)繕?biāo)進(jìn)行參考。如果您想了解elisa試劑盒，上海通蔚有15年以上的ELISA試劑盒生產(chǎn)經(jīng)驗，可提供4000多種 ELISA試劑盒，主要采用夾心法和競爭法，覆蓋3000個靶標(biāo)，涉及小鼠、大鼠、牛、兔、豬等20多個種類。