實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定？教你如何挑選優(yōu)質(zhì) ELISA 試劑盒

  酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)。用于檢測(cè)抗體或抗原的存在與濃度，用于檢測(cè)抗體或抗原的存在與濃度。如今，市面上供應(yīng)各樣的ELISA試劑盒，種類(lèi)多樣，適用于越來(lái)越多的目標(biāo)，每種試劑盒都聲稱(chēng)具有特異性、靈敏度和可靠性。在這里，上海通蔚生物將帶您了解選擇ELISA試劑盒考慮關(guān)鍵因素，確保您的選擇符合您的目標(biāo)和要求。

  確定自己ELISA試劑盒類(lèi)型

  ELISA試劑盒分為4種類(lèi)型，分別是直接elisa、間接elisa、夾心elisa和競(jìng)爭(zhēng)elisa。

  1、直接ELISA、與報(bào)告酶（例如HRP或AP）綴合一抗特異性結(jié)合微孔板孔中包被的抗原。

  2、間接ELISA遵循類(lèi)似的原理，但使用未標(biāo)記的一抗與偶聯(lián)的二抗配對(duì)。

  3、夾心ELISA用一抗包被孔，一抗又結(jié)合樣品抗原。將添加一組新的抗體，在抗原上形成三明治（夾心）。

  4、在競(jìng)爭(zhēng)性ELISA中，未標(biāo)記的一抗首先與樣品抗原復(fù)合。將它們添加到涂有抗原的孔中。洗滌后，只有游離的、未結(jié)合的抗體才會(huì)與包被的抗原結(jié)合。添加偶聯(lián)的二抗和底物后，會(huì)產(chǎn)生與樣品中抗原量成反比的信號(hào)；樣品中抗原的量越大，信號(hào)越弱。該ELISA的另一種變體使用一抗來(lái)包被孔。然后標(biāo)記的抗原將與樣品抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。所得的檢測(cè)信號(hào)仍然成反比。

  具體選擇哪種類(lèi)型取決于自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)和抗原的潛在豐度，例如復(fù)雜樣品中的分析物豐度較低，那么夾心ELISA可能是最佳選擇。這將允許多次洗滌以降低背景噪音，并且仍然允許放大二抗的信號(hào)以確保整體靈敏度。如果您對(duì)檢測(cè)特定的免疫球蛋白感興趣，那么間接ELISA是合適的選擇。如果測(cè)定速度和簡(jiǎn)單性是最重要的因素，那么直接ELISA可能是您的最佳選擇。確定檢測(cè)的總體目標(biāo)將幫助您確定哪種ELISA類(lèi)型最適合您的需求。詳情可以參考《elisa試劑盒有哪幾種類(lèi)型？elisa四類(lèi)型圖解》

  如何選擇正確的ELISA試劑盒

  靶抗原特異性

  靶抗原特異性直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性?？紤]您的實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)和目標(biāo)的蛋白質(zhì)。該試劑盒是否識(shí)別全長(zhǎng)蛋白質(zhì)或特定表位？評(píng)估套件與您的目標(biāo)的兼容性可確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和相關(guān)性。交叉反應(yīng)性也可能是針對(duì)肽產(chǎn)生的抗體的一個(gè)問(wèn)題，因此確保適當(dāng)?shù)目刂频轿缓苤匾?/span>

  為了確保選擇具有高靶抗原特異性的ELISA試劑盒，你可以考慮以下幾個(gè)方面：

  1、查閱文獻(xiàn):了解其他研究者在類(lèi)似實(shí)驗(yàn)中使用的試劑盒，并查看他們對(duì)試劑盒特異性的評(píng)價(jià)。

  2、聯(lián)系試劑盒供應(yīng)商:向供應(yīng)商咨詢(xún)?cè)噭┖械目贵w特異性，并索取相關(guān)數(shù)據(jù)，例如抗體與靶抗原不同亞型的結(jié)合能力。

  3、進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn):使用少量樣品測(cè)試不同的試劑盒，比較它們的背景信號(hào)和特異性。

  ELISA靈敏度和動(dòng)態(tài)范圍

  ELISA試劑盒的靈敏度是一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，它們決定了試劑盒的檢測(cè)能力，并影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。，尤其是在處理低豐度蛋白質(zhì)時(shí)。評(píng)估試劑盒的檢測(cè)下限(LOD)和動(dòng)態(tài)范圍，因?yàn)檫@些因素決定了試劑盒在一定濃度范圍內(nèi)準(zhǔn)確定量蛋白質(zhì)的能力。具有寬動(dòng)態(tài)范圍的高靈敏度套件通常更適合多功能應(yīng)用。

  ELISA靈敏度的主要影響因素之一是所檢測(cè)底物的選擇。一般來(lái)說(shuō)，化學(xué)發(fā)光底物的靈敏度是比色底物的10-20倍。如果需要更高的靈敏度，您甚至可以考慮使用電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)、免疫PCR甚至單分子檢測(cè)的平臺(tái)，盡管所有這些解決方案雖然非常靈敏，但需要購(gòu)買(mǎi)專(zhuān)門(mén)的設(shè)備和試劑。

  測(cè)定持續(xù)時(shí)間和工作流程復(fù)雜性

  考慮ELISA試劑盒的實(shí)際問(wèn)題，例如總體檢測(cè)持續(xù)時(shí)間和工作流程的復(fù)雜性。有些實(shí)驗(yàn)可能需要快速周轉(zhuǎn)，而另一些實(shí)驗(yàn)可能需要更長(zhǎng)的潛伏期。評(píng)估實(shí)驗(yàn)方案的步驟，包括樣品制備、孵育時(shí)間和檢測(cè)方法，以確保與實(shí)驗(yàn)室的日程安排和資源兼容。

  ELISA樣品

  不同的ELISA試劑盒針對(duì)特定樣品類(lèi)型進(jìn)行了優(yōu)化，從血清和血漿到細(xì)胞裂解物和組織勻漿。驗(yàn)證所選套件是否適合您要分析的樣品類(lèi)型。某些試劑盒可能需要另外外的樣品制備步驟，忽視這一方面可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果受損。

  ELISA樣品制備有一些一般規(guī)則；最大限度地減少凍融循環(huán)，在樣品緩沖液中添加蛋白酶抑制劑，確保評(píng)估潛在的基質(zhì)效應(yīng)并確保優(yōu)化樣品稀釋。

  ELISA中的交叉反應(yīng)和干擾

  檢查與相關(guān)蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)的可能性或樣品中常見(jiàn)物質(zhì)的干擾。評(píng)估試劑盒的特異性及其區(qū)分密切相關(guān)分子的能力對(duì)于獲得準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)至關(guān)重要。

  請(qǐng)務(wù)必牢記，廠家可能不會(huì)針對(duì)所有樣品測(cè)試其ELISA試劑盒，因此始終存在交叉反應(yīng)和/或干擾的可能性。運(yùn)行適當(dāng)?shù)年?yáng)性和陰性對(duì)照對(duì)于確保結(jié)果有效至關(guān)重要。

  ELISA廠家可靠性

  可靠的ELISA試劑盒經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的驗(yàn)證過(guò)程，以確保一致的性能。尋找經(jīng)過(guò)特異性、敏感性和重現(xiàn)性驗(yàn)證的試劑盒。質(zhì)量控制措施，例如批次間的一致性，表明廠家致力于提供可靠的結(jié)果。

  ELISA數(shù)據(jù)分析

  評(píng)估ELISA試劑盒廠家提供的數(shù)據(jù)分析工具和報(bào)告功能。用戶(hù)友好的軟件具有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析功能，可簡(jiǎn)化結(jié)果解釋并提高實(shí)驗(yàn)的整體效率。

  如果您正在執(zhí)行定量ELISA，即使您沒(méi)有執(zhí)行，也請(qǐng)務(wù)必注意您的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。確定是否需要僅使用線(xiàn)性回歸模型來(lái)繪制數(shù)據(jù)，或者是否應(yīng)該使用參數(shù)邏輯(4PL)模型。

  售后支持

  信譽(yù)良好的廠家提供全面的文檔，包括詳細(xì)的協(xié)議和故障排除指南。此外，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到挑戰(zhàn)時(shí)，可靠的客戶(hù)支持非常寶貴。優(yōu)先考慮在客戶(hù)服務(wù)方面享有良好聲譽(yù)的廠家。

  最后，大家在選購(gòu)ELISA試劑盒，要考慮合適的試劑盒是非常重要的，它決定你實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。通過(guò)上述為大家介紹選擇試劑盒考慮的因素，大家可以參考！在選擇ELISA試劑盒時(shí)候心中有數(shù)。上海通蔚生物擁有15年以上的ELISA試劑盒生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，搭建了ELISA試劑盒開(kāi)發(fā)和成熟抗原-抗體系統(tǒng)的良好平臺(tái)。如果需要考慮訂購(gòu)ELISA試劑盒，歡迎前來(lái)咨詢(xún)。