細胞培養(yǎng)入門指南：步驟與注意事項詳解

  上篇給大家講過《常見細胞基培養(yǎng)有哪些種類》，細胞培養(yǎng)基是細胞不可缺少的部分。今天圍繞細胞培養(yǎng)，小蔚給結合自己多年的經驗給大家講講細胞培養(yǎng)的步驟。讓各位科研小伙伴在實驗室也能順利實驗。

  細胞培養(yǎng)的步驟

  第一步：需要將超凈臺及所用儀器耗材進行紫外線滅菌，時間為30分鐘。然后我們打開水浴鍋預熱至37度。將培養(yǎng)基放入37度的培養(yǎng)箱或水浴鍋預熱。

  第二步：從夜氮罐中取出凍存細胞，然后將凍存細胞放置-80度的冰箱等5-10分鐘。將細胞至于冰箱讓管內液氮蒸發(fā)后再進行水浴可以避免水浴過程中發(fā)生安全事故。

  第三步：用37度水浴快速融化細胞，待凍存細胞融化至僅有米粒大小冰塊時停止水浴，融化時間通常在1分鐘左右。這里建議將凍存的細胞裝在透明的PE手套中進行水浴，這樣可以有效避免水浴帶來的污染。

  第四步：將凍存管在150g條件下離心1-2min，注意參數約為90-1000rpm，不同離心機可能有差異，需提前設置好。

  第五步：打開超凈臺取出預熱好的培養(yǎng)基，然后用酒精噴灑消毒后放入超靜臺內，隨后在培養(yǎng)瓶內加10毫升培養(yǎng)基。

  第六步：離心完成后取出凍存的細胞，用酒精擦拭消毒后小心開啟凍存管，棄上清，取細胞沉淀重懸后接種至培養(yǎng)瓶內，注意重懸吹打細胞力度不要過大，用十字法或八字法混勻細胞。

  第七步：鏡檢確認細胞均勻分布在培養(yǎng)基后將細胞放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

  細胞培養(yǎng)注意事項

  1、細胞培養(yǎng)要遵循安全標準以在實驗室中保護自己。需要個人防護裝備（實驗室外套、實驗室手套、安全眼鏡）。特別是，在處理液氮時，請務必遵守各實驗室制定的規(guī)定，例如使用特殊的絕緣手套、全臉面罩、防濺圍裙和手套。另外，為了防止頭發(fā)污染，最好將長發(fā)扎起來或戴上帽子。

  為避免空氣傳播細菌，請將正常實驗和組織培養(yǎng)的實驗服和鞋分開，并避免污染培養(yǎng)室環(huán)境。通過穿著不同顏色的夾克或實驗室外套更容易區(qū)分它們。

  2、實驗環(huán)境的準備。始終保持超凈工作臺、工作臺以及其他處理細胞的區(qū)域周圍區(qū)域的清潔。避免將紙板等包裝物放置在進行細胞培養(yǎng)的區(qū)域。請務必定期檢查和清潔培養(yǎng)箱、超凈工作臺、離心機、顯微鏡等，保持清潔。定期使用SigmaClean®清潔水浴。

  所有使用的材料，如試劑、燒瓶和培養(yǎng)基，都應貼上標簽或標明日期和內容，以明確里面的內容。另外，使用前請務必檢查所用培養(yǎng)基和試劑的質量。每天檢查培養(yǎng)基是否有細菌或真菌污染的跡象。即使您購買了市售的培養(yǎng)基，也請務必進行此項檢查。

  所有與細胞直接接觸的培養(yǎng)箱、培養(yǎng)設備、培養(yǎng)基等必須無菌，防止微生物污染。因此，所有使用過的物品都必須進行滅菌或消毒。

  一般用于消毒的酒精有效濃度為乙醇70%左右，異丙醇60-70%左右，通過脫水凝固進行消毒。乙醇對大多數病毒有效（不適用于沒有外殼的病毒），異丙醇對病毒無效。

  滅菌主要有三種：高壓滅菌、干熱滅菌和過濾滅菌。

  3、在實際操作過程中，還有一些需要注意的地方。嘗試一次僅使用一種類型的細胞系。這降低了交叉污染和錯誤標簽的風險。此外，如果超凈工作臺中發(fā)生細菌或支原體的氣溶膠傳播，受影響的瓶子和燒瓶也會減少。

  在操作之間使用合適的消毒劑（例如 70% 乙醇）對工作表面進行消毒，并在處理不同細胞系之間等待至少 15 分鐘。培養(yǎng)過程中，每個細胞系的培養(yǎng)基瓶盡可能遠離。應定期檢測細胞是否有支原體感染。

  上述為大家介紹細胞培養(yǎng)過程步驟及注意事項，希望上述文章對大家有所幫助。如果您對細胞培養(yǎng)過程還有疑問，可以和我們溝通。上海通蔚可以產品有細胞，如果想了解了解細胞系，歡迎前來咨詢。