PCR 家族新成員：RT-PCR 為何如此重要？

  PCR技術(shù)只能擴(kuò)增DNA，而不能直接擴(kuò)增RNA，因此，逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)PCR(RT-PCR)誕生，逆轉(zhuǎn)錄酶可以將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA (互補(bǔ) DNA)，cDNA 與原來的 RNA 序列互補(bǔ)，但它具有 DNA 的穩(wěn)定性和易于擴(kuò)增的特性。RT-PCR 是一項(xiàng)強(qiáng)大的工具，它將 PCR 技術(shù)的應(yīng)用范圍擴(kuò)展到了 RNA 分子，為生命科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)診斷做出了重要貢獻(xiàn)。接下來，上海通蔚為大家詳細(xì)介紹下什么是什么是RT-PCR？和PCR有啥區(qū)別？一起來了解下它們概念，來更好的做PCR實(shí)驗(yàn)。

  什么是PCR

   PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，由KaryMullis在20世紀(jì)80年代開發(fā)，如今用于從少量DNA產(chǎn)生大量DNA。

    PCR通常是其他過程中使用的步驟，例如DNA測(cè)序、病原體檢測(cè)和凝膠電泳。PCR是一種重要的診斷技術(shù)，常用于病毒學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、真菌學(xué)和牙科等領(lǐng)域。

    聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種用于制備DNA特定片段的多個(gè)副本的方法。這個(gè)過程從少量模板DNA開始，然后通過稱為聚合酶的酶進(jìn)行復(fù)制。通過重復(fù)加熱和冷卻循環(huán)可以增加復(fù)制的數(shù)量，這會(huì)分離DNA鏈，以便它們可以再次復(fù)制。

    PCR的最終產(chǎn)物是目標(biāo)DNA序列的大量相同副本。然后該產(chǎn)品可用于進(jìn)一步分析，例如測(cè)序或Southern印跡。PCR還可用于從mRNA模板分子制備cDNA。

圖1 PCR擴(kuò)增示意圖

  什么是RT-PCR

  逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）允許使用RNA作為模板。另一個(gè)步驟可以檢測(cè)和擴(kuò)增RNA。使用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA逆轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA(cDNA)。RNA模板的質(zhì)量和純度對(duì)于RT-PCR的成功至關(guān)重要。RT-PCR的第一步是合成DNA/RNA雜交體。逆轉(zhuǎn)錄酶還具有RNaseH功能，可降解雜交體的RNA部分。然后單鏈DNA分子通過逆轉(zhuǎn)錄酶的DNA依賴性DNA聚合酶活性完成成cDNA。第一鏈反應(yīng)的效率會(huì)影響擴(kuò)增過程。從這里開始，使用標(biāo)準(zhǔn)PCR程序來擴(kuò)增cDNA。通過RT-PCR將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA的可能性有很多優(yōu)點(diǎn)，它主要用于基因表達(dá)分析。RNA是單鏈且非常不穩(wěn)定，這使得其使用具有挑戰(zhàn)性。它通常作為qPCR的第一步，定量生物樣品中的RNA轉(zhuǎn)錄本。

  RT-PCR和PCR應(yīng)用

  PCR通常用于DNA檢測(cè)和分析，例如檢測(cè)基因突變、DNA序列分析等。

  RT-PCR通常用于檢測(cè)RNA的表達(dá)水平，例如檢測(cè)基因的轉(zhuǎn)錄水平、miRNA的表達(dá)等。

  RT-PC和PCR區(qū)別

  ①相同點(diǎn)：

  都是基于PCR技術(shù)的擴(kuò)增技術(shù)；

  都需要引物和酶等試劑；

  都可以用于檢測(cè)DNA或RNA序列。

  ②不同點(diǎn)：

  PCR適用于擴(kuò)增DNA序列；

  RT-PCR適用于擴(kuò)增RNA序列；

  上述為您介紹了什么是RT-PCR？PCR和PCR-RT區(qū)別。了解區(qū)別，對(duì)于PCR實(shí)驗(yàn)應(yīng)該有個(gè)清晰的認(rèn)識(shí)。實(shí)驗(yàn)選擇PCR和RT-PCR具體要結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)及檢測(cè)對(duì)象，RT-PCR 技術(shù)的出現(xiàn)確實(shí)打破了傳統(tǒng) PCR 的局限性，使得我們可以研究和分析 RNA，為分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究打開了新的窗口。也祝您在生物實(shí)驗(yàn)更上一層樓。